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实验三_叶绿体色素提取、分离与性质分析
二、实验原理
2.类胡萝卜素
(一)叶绿体色素:
胡萝卜素
叶黄素
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(三)叶绿素的光学性质
叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性,表现出一定的吸收光谱,可用分光光度计精确测定。
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三、实验材料与试剂
新鲜的菠菜叶片。
95%乙醇 、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油。
量筒,滤纸,大培养皿一只,小培养皿一只,长滴管,剪刀。
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四、实验步骤
1、 叶绿体色素提取:
将菠菜叶片擦净,去中脉后取 10g剪碎,加少许碳酸钙和石英砂,再分次加入10mL酒精研磨,过滤,定容至50ml,分装于5个试管内,容量分别为10ml。
2
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3、叶绿体色素吸收光谱曲线
取1ml提取液于比色杯中(试管2),加3ml95%乙醇。
用95%乙醇作为对照,在400~700nm之间每隔20nm测一次光。
记录波长和吸光度A于下表中,并在标准绘图纸上绘出叶绿体色素的吸收光谱曲线。
λ
(nm)
400
420
440
460
480
500
…...
600
620
640
660
680
700
A
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4、叶绿体色素含量的计算
在标准曲线上查出波长600nm时的叶绿体色素浓度。
叶绿体色素含量(mg·g-1)=
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5、叶绿素提取液荧光现象观察
取试管3:
从与入射光垂直的方向观察;
再在透射光方向观察叶绿体色素溶液的颜色;
记录叶绿素体色素溶液颜色有何不同 ,分析原因。
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6、光对叶绿素的破坏作用
将试管4置于暗处,试管3置于强光下,照射2~3小时后,观察试管颜色的变化,解释这种现象。
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7、铜代叶绿素反应
向试管5中逐滴加入浓盐酸,并不断摇匀,至颜色变化,观察并记录现象;
向变色后的叶绿素溶液中加入少量醋酸铜,并在酒精灯上缓缓加热,观察并记录颜色的变化。
分析原因。
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