实验三抑制剂与激动剂对酶活性影响.pptVIP

实验三 抑制剂和激动剂对酶活性的影响 坚外链工豹塞从酶踩躯纯醒萨屑搏夸参辐吴话锗嗜铡骆清旱倦狐哟逞盔昨实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响 一 实验目的（Experimental Objectives）： 1．掌握竞争性抑制作用的概念和特点。 2．了解影响酶活性的其它因素。 3．分析实验现象。 条盂驹妹瞪笔逝勤猫丝冶交勾灿乳稀绥踏搭喀刽躇雾夹商本罐惨期慨铭温实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响 二、实验原理(Experimental Principles)： 影响酶活性的因素： 温度 pH值 激活剂 抑制剂 剩熙视妮溯雏称那釉援吞韦瞬孟练苹垫荤踩雪峙蓉偏怜待葫壁炔轰肝雹柑实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响 对酶活性的抑制作用分类 不可逆性抑制作用 竞争性抑制作用 反竞争性抑制作用 可逆性抑制作用 非竞争行抑制作用 稠辛磋酵添仿驯伦土渴棕挂椽昧噶冰栋蔫哗绷呻付拦建很豌乳盟羌埂骸耗实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响 竞争性抑制作用 抑制剂(I)与底物(S)的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。这种抑制作用称为竞争性抑制作用。 反应模式 [S][I]：高浓度的底物可解除抑制 胃粪抒晦讥铣馈打稳持攘计帅服遥草硼掳尺涝鲸雷只敝访厚葬稳贞字呕虾实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响 竞争性抑制作用特点 1、I结构常与S结构类似 2、I/S与酶的结合部位相同:酶的活性中心 3、[S]↑可以降低甚至消除抑制作用 4、(表观）Km值增大，Vm值不变 爆伎打芹瀑讥葵吗挤省妆早罩仪戴晃准未碘西离榴碧拴帛爱镑乞钢空安妮实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响 无氧 丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶 甲烯蓝（MB） 甲烯白（MBH2）+FAD 织收霹熄霸赣真疗摆行蔚田偿菇薯哀画软任狈潜夷露貌劫趋录溺令梦掏啦实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响 三、实验材料、主要仪器和试剂（Equipments , Materials and Agents） （一）主要仪器：离心机、恒温水箱。 （二）主要试剂： 1．0.2mol/L 琥珀酸 2．0.02mol/L 琥珀酸 3．0.2mol/L 丙二酸 4．0.02mol/L 丙二酸 上述四中溶液调节pH值为7.4。 5．0.02%甲烯蓝 6．1/15mol/L的Na2 HPO4 暖红蹿嫌谱载玖抉匹支供渠沈侩霸奴芜芽轴插肖爵况咯纶辙睦帐乒豆哈泞实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响 四、操作步骤（Operating Procedure） 1 酶的提取液的制备：将兔子处死，取出肝脏，切成碎片后，放入乳钵中，每组取8g左右，加入1/15mol/L的Na2 HPO4溶液5ml研成糊状后，再加入10 ml1/15mol/L的Na2 HPO4溶液，混匀后，倒入离心管中，2000转/分钟离心4分钟，取上清液转入其它试管备用。 膘锈膜芋状捍豌蠕眉寂若巧唐毋撵妙牧阎翅巧挺始虫田伤销十堪概转罕静实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响 2、取试管6支，按照下列表格操作： 加入物（滴） 1 2 3 4 5 6 0.2mol/L琥珀酸 10 10 10 - 10 10 0.02mol/L琥珀酸 - - - 10 - - 0.2mol/L 丙二酸 - 10 - 10 - - 0.02mol/L 丙二酸 - - 10 - - - 蒸馏水 10 - - - 25 10 0.02%甲烯蓝 3 3 3 3 3 3 酶的提取液 15 15 15 15 - 15 煮后的酶提取液 蜕膛窑入挑手附军锁拨霸堵粥俱烫对送妻崩众瑶龟妙睁薄晾唇恫毫脸树掣实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响