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高效液相色谱法测定果汁中的纽甜含量 徐美琴 摘 要:采用高效液相色谱检测果汁中的纽甜，果汁经过水浴加热后用超纯水补充到原来的重量，经过滤用配有二极管阵列检测器的高效液相检测，选择Agilent C18色谱柱检测纽甜。在空白的样品基质中添加200mg/L水平的纽甜标准溶液，按本实验确认方法进行预处理，平行操作2次，进行分析，回收率为185.36%和177.11% 关键词:高效液相色谱法 果汁 纽甜 二极管阵列检测器 0 引言 纽甜简称NTM，其结构式如下： 纽甜是一种新型、高效、非营养型甜味剂，系阿斯巴甜的衍生物，其稳定性和使用成本均优于阿斯巴甜。甜味纯正，清新自然，与阿斯巴甜相似，但稳定性较高。 根据中华人民共和国卫生部2003年第4号公告，纽甜的使用范围为各类食品饮料，使用量为按生产需要适量使用。目前在国内销售使用纽甜的进口食品为餐桌用方糖，国内产品中仅见乳饮料标签标识添加有纽甜。纽甜的甜度甜度为砂糖8000 倍左右，低能量或无能量、可供糖尿病人食用、不致龋齿、可促进双歧杆菌增殖等；不会引起蛀牙、血糖波动，是保健型食品的首选甜味剂。 在酸性条件下，纽甜具有与阿斯巴甜大致相同的稳定性。在中性pH范围或瞬时高温等条件下，纽甜要比阿斯巴甜稳定得多，这大大扩大了其应用领域，如在焙烤食品中的应用。但目前国内并无食品中纽甜含量的检测方法。 目前，对于人工合成甜味剂的测定方法主要有离子色谱法、毛细管电泳法、高效液相色谱法、液相色谱—质谱法等。其中高效液相色谱法主要是针对纽甜、甜蜜素、糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜中的一种或两种的检测。随着各国对甜味剂使用要求越来越严格，允许添加量不断降低，使得开发更为简单快速、灵敏度高的检测方法成为必要。因此研究人工合成甜味剂的检测方法不仅是技术发展的需求，也是实际应用的需求。 对近5年的国内外文献检索，未见及少见有关食品中纽甜的检验方法报道，本研究建立了纽甜的检验方法。 综上，本次实验采用高效液相色谱检测果汁中的纽甜。 1 试验部分 1.1 仪器与试剂 仪器：美国戴安（型号：U3000）高效液相（配有二极管阵列检测器）； 色谱柱：Agilent C18柱 (25cm长，4.6mm柱径)； 超声波清洗器； 真空抽滤泵； 水浴锅； 分析天平； 试剂：乙腈、甲醇为色谱纯，乙酸铵（缓冲液），试验用水为Milli-Q超纯水。 纽甜标准品：纯度≥99.99%； 1.2 高效液相色谱分析原理及色谱条件 1.2.1原理 高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。相比较与其他的测定方法，高效液相色谱法对于一种或者两种人工合成的甜味剂检测效果最佳，因此文章选用此法对纽甜进行检测。 1.2.2色谱条件 色谱柱：AgilentC18柱(25cm长，4.6mm柱径)； 流动相：35%乙腈和65%缓冲剂(乙酸铵)； 流速：1.0mL/min； 波长：210nm； 柱温：25℃； 进样量：20μL； 运行时间：10min。 1.3 缓冲液的配制 0.02mol/L乙酸铵的配制：称取1.5409g乙酸铵于烧杯中，用超纯水溶解后，定容至1000ml容量瓶中。 1.4 标准物质 纽甜标准储备液：准确称取0.1000g纽甜标准品，用35:65的乙腈和乙酸铵溶解定容至100.0mL。纽甜含量为1mg/mL，作为储备溶液（母液）； 纽甜标准使用溶液：吸取纽甜标准储备液1.00mL至100.0mL容量瓶中，加超纯水至刻度，经0.45μm滤膜过滤。该溶液每毫升相当于10.0μg的纽甜（10mg/L）。 1.5 样品前处理 准确称取果汁50g,并且记录果汁和烧杯的总重量。在100℃水浴下除去CO2以及酒精后，取出冷却至室温，用超纯水补加到原来的总重量。经0.45μm滤膜过滤后进样测定。 1.6 样品测定 用自动进样器准确对样品处理液和标准使用液各取20μL，注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液的保留时间为依据进行定性，以其峰面积求出被测样品中纽甜的含量，供计算。 x%= 其中：Asample，Astandanrd分别为纽甜样品处理液和标准使用液的峰面积； msample，mstandanrd分别为纽甜样品处理液和标准使用液的物质的量； F：纽甜标准样品纯度，%。 2 结果与分析 2.1 样品处理方法 本实验在样品处理上较为简单，样品中若含有CO2和酒精应加热挥发，而由于纽甜在高温下稳定性受影响，故加热温度不宜过高。但发现温度过高，回收率偏低；温度过低，酒精无法去除干净或挥发时间过长。本实验表明通过水浴，加热至100℃的状态下，进行酒精挥发和除去CO2这一方法是可行