烤烟叶片发育过程中类胡萝卜素代谢的初步研究.doc

烤烟叶片发育过程中类胡萝卜素代谢的初步研究 韦凤杰 （河南农业大学农学院　国家烟草栽培生理生化研究基地，河南　郑州　450002） 　　摘　要　利用反相高效液相色谱法和分光光度计法初步对不同部位烤烟叶片发育过程中类胡萝卜素进行了测定。结果表明，烤烟发育过程中类胡萝卜素含量随生育时期的推进而逐渐下降，但不同部位叶片的类胡萝卜素代谢有明显差异。烤烟发育过程中中部叶片的β胡萝卜素、新黄质、紫黄质、叶黄质、叶黄素均在欠熟期有一低谷，且定长－欠熟－尚熟阶段变化呈明显“V”型。与下部叶片、中部叶片相比，上部叶片发育后期β胡萝卜素、新黄质、紫黄质、叶黄质、叶黄素含量均较高，其中β胡萝卜素含量最高，为68.04μg/g。　　关键词　烤烟　叶片　发育　类胡萝卜素　代谢 　　类胡萝卜素是存在于植物和微生物中的脂溶性色素，通常是指C40的碳氢化合物（胡萝卜素）和它们的氧化衍生物（叶黄素）两大类色素的总称[1,2]。类胡萝卜素在植物叶绿体光合作用中起着重要作用，它们是光合作用中光传导途径和光反应中心的重要结构成分，担当叶绿体光和天线的辅助色素，帮助叶绿体吸收光能；另一方面，它们在高温、强光下能通过叶黄素循环，以非辐射的方式耗散光系统II(PSII)的过剩能量保护叶绿素免受破坏[3,4,5]。类胡萝卜素也是合成植物激素ABA的前体[6]。在烟叶中，类胡萝卜素作为许多重要致香成分的前提物对烟草香味品质的形成有重要作用[7,8]。烟草品质形成是烟草在品种、生态环境等综合条件下发育的结果。研究烟草发育过程中的类胡萝卜素代谢具有重要意义。 1 材料与方法1.1 试验材料　　试验以烤烟K326为供试品种，设盆栽试验。地点设在河南农业大学科教示范园区国家烟草栽培生理生化基地试验网室内。　　试验用素烧陶盆，高40cm，盆口直径40cm，盆底直径35cm，试验前，先在网室内起垄，按100cm×45cm，行、株距，将陶盆置于垄上。纯施化肥，每盆施纯N2.5g，KNO313.89g，NH4H2PO43.47g，过磷酸钙21.27g，K2SO41.05g；各处理NH4+－N与NO3-－N按1：3，N、P2O5、K2O等量，且N:P2O5:K2O=1:2:2.5，每盆施纯N2.5g。每盆装土20kg，装盆前土经过风干，并过0.5mm×1mm网筛。　　　供试土壤情况：pH=7.8，有效氮5.05mg/100g，有效磷10.1mg/1000g，速效钾105mg/1000g。按试验设计，将土壤与肥料混合均匀后装盆。装盆时每盆埋插塑料管供浇水用。5月17日移栽烟苗，移栽后定量浇水，保持每盆含水量基本一致。田间管理如常规。1.2 测定项目与方法　　对烤烟分上、中、下三部分取叶（从下往上数分别为第3－5片、第11或12片、第16－18片叶）于1/2定长、定长、欠熟、尚熟、成熟、完熟分六次取样，每处理重复三次。　　总类胡萝卜素按采用比色法[9]法进行。计量单位：mg/g。　　β－胡萝卜素、新黄质、紫黄质、叶黄质测定方法为反相高效液相色谱法。工作条件为：液相色谱仪系统包括Waters515泵，Waters2487紫外可见光分光光度检测器，Empower色谱工作站，Rheodyne7725i型手动进样阀。试剂：甲醇为Sigma公司生产的色谱纯试剂，异丙醇为J.T.Baker公司生产的色谱纯试剂；叶黄质、紫黄质、新黄质植物色素标准物由日本WAKO公司生产，β－类胡萝卜素、β－阿朴－8－胡萝卜醛、BHT等购于Sigma公司。样品前处理：取新鲜烟叶，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀；称取剪碎的新鲜烟叶样品5g，放入研钵中，加少量石英砂和5ml 90%丙酮（内含0.1％BHT）研成匀浆，再加丙酮10ml，继续研磨至组织变白，然后倒入100ml三角瓶，用45ml 90%丙酮（内含0.1％BHT）分三次冲洗研钵后倒入三角瓶中，摇床振荡萃取30min，过滤，滤渣在用10ml 90%丙酮（内含0.1％BHT）洗涤2～3次，至滤渣为白色，合并滤液，定容至100ml，取其中6ml到离心管，加入0.1g醋酸铅，10000转/分4℃低温离心5分钟，用0.45μm针头过滤器过滤。计量单位：μg/g。 2 结果与分析2.1 不同部位烤烟叶片中β－胡萝卜素的代谢动态　　不同部位烤烟叶片中β－胡萝卜素的代谢动态不同（图1）。由图1可见，不同部位烤烟叶片β－胡萝卜素的动态变化差异较大。总的趋势为：下部叶片、中部叶片其含量随生育时期的推进而下降，但上部叶片发育后期β－胡萝卜素含量却呈上升势头。其中：中部叶片在定长至尚熟期呈明显“V”型变化，整个时期呈“M”型变化；下部叶片整体呈下降趋势；上部叶片前中期略有下降，中后期上升明显，其完熟期含量为中部、下部叶片的约5倍。 图1　烤烟叶片中