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转草酸氧化酶基因油菜的PCR检测 摘要：通过对转草酸氧化酶基因的中双九号油菜导入的卡那霉素抗性基因进行鉴定筛选，结果表明：被转化后的质粒通过4代自交后，经PCR技术初步检测鉴定，电泳成图后观察，各质粒代号植株所提取的基因均能在相应的泳道上出现预期的DNA条带，说明被转化的植株四代自交后达到纯合。 关键词：转基因油菜；草酸氧化酶Identification the transformed Brassica napus with oxalate oxidase gene by PCR Abstract:Converted plasmid through four generations after it make, the PCR technology preliminary inspection appraisal, electrophoresis into map observation, the plasmid are in the corresponding lane expected to appear on DNA strip that was converted into the plant four generations after it make to homozygous. Key words:Genetically modified rapeseed;oxalate oxidase;PCR detection;Kanamycin-resistant 目 录 文献综述 1 1植物转基因的目的意义 1 2 油菜转基因的检测 1 3 PCR技术 2 1 前言 5 2 材料和方法 5 2.1 实验材料与器材 5 2.2 实验方法 6 3 结果与分析 8 3.1卡那抗性基因的PCR检测 8 3.2　PCR产物分析 9 4小结与讨论 10 参考文献 12 致 谢 13 文献综述 1植物转基因的目的意义 转基因是利用分子生物学方法，将某些生物基因转移到其他物种中，改造生物遗传物质。使新物种在性状、营养和消费品质等方面向人类需要的目标转变的一门技术，作为传统杂交育种技术的延伸和发展，转基因技术实现了有利于功能基因在不同物种之间的交换和转移，大大提高了作物育种效率。加快了农作物新品种培育的更新换代的速度，自20世纪70年代转基因技术首次出现以来，时至今日，转基因技术已在农作物遗传改良方面取得了重大进展，一大批新型抗除草剂，抗虫、优质、功能型转基因农作物种植面积达到1.34亿公顷，约占全球种植总面积的9%。迅猛发展的转基因技术不仅为人类带来了巨大的经济效益和社会效益，同时也解决 了人类面临的环境恶化、资源匮乏等方面发挥了巨大作用，转基因技术的快速发展与应用正在深刻影响着全球农业化、经济与社会发展 近年来，随着生物技术的发展，多种转基因农作物(genetic modified crops，GMC)及其加工产品已广泛应用到食品制造业中。生物技术的发展显著提高了农产品的产量和质量，在一定程度上缓解了人口过多、自然资源匮乏、可耕作土地面积减少和不可预期的自然灾害带来的影响等[1]。 由于转基因植物体内的DNA分子被人为地修饰改造，遗传性状也发生了改变。其安全性成为了人们关注的话题。为了消除转基因产品的安全隐患．许多国家对转基因产品的研究开发、生产销售及其在自然环境里的代谢降解等各个环节都制定了严格的法规条例，对转基因检测技术的灵敏度和准确性提出了严格的要求[2]。各国转基因标识制度的相继建立，对转基因检测技术的灵敏度和准确性提出了严格的要求，各种转基因检测技术也成为了研究热点。常用的转基因检测方法大致分为两个方向，一是以检测外源基因为目标，二是以检测外源蛋白为目标。外源基因检测方法适用范围广、准确性高，其它的检测方法，如外源蛋白检测法对于含不表达、或表达量低得不可测的目的基因的转基因产品以及深加工产品则无法检测，故检验机构的实际检测中多采用外源基因检测[3]。 油菜经过农杆菌等手段介导转化后，大部分外植体包括细胞、组织、器官或植株是没有被转化的，只有少数例外，这就需要采用特定的方法将未转化的细胞、组织、器官或植株与转化的区分开来，从而淘汰未转化的[4] 。在分子水平上对转基因植物的鉴定方法主要有PCR检测、核酸分子杂交以及基于免疫原理的Western印迹分析。利用PCR技术可以在短时间内对转基因植物进行初步的鉴定。是转基因植物鉴定中最简单、最常用的方法[5] 。根据所导入的基因序列设计一对特异性引物，对样品DNA进行扩增，所需的模板DNA量极少，而且使用粗提的DNA就可以得到良好的扩增效果。卡那霉素抗性(kanr)基因即新霉素磷酸转移酶基因(nptII)，亦称为氨基糖苷磷酸转移酶基(aphII)，来自大肠杆菌(Escher