胃癌bgc一823肿瘤细胞sp亚群初步研究.docVIP

分离鉴定人胃癌HGC-27细胞系中肿瘤干细胞的研究 高钢龙 张学利 孙振亮 刘文勇 张 萍 叶冬霞 基金项目：上海市卫生局科学基金资助项目（2010Y079） 作者单位：201400 上海，上海市奉贤区中心医院普外科（高钢龙、张学利、孙振亮）；上海交通大学医学院附属第九人民医院普外科（刘文勇、张萍、叶冬霞） 作者：高钢龙，电子邮箱：GGL149@ [摘要] 目的 分析人胃癌细胞系HGC-27细胞中肿瘤干细胞相关的侧群细胞（SP）亚群的比例，分选出相关的SP和非侧群细胞（NSP），并鉴别相关的SP是否具有干细胞的生物学特性。方法 制备人胃癌细胞系HGC-27细胞中细胞悬液，经Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）染色（其中对照组同时加入拮抗剂维拉帕米），应用流式细胞仪分析相关SP亚群。通过流式细胞仪分选出人胃癌细胞系HGC-27细胞中相关的SP细胞。克隆形成实验和MTT实验检测相关的SP和NSP细胞增殖能力差异。利用磁珠筛选实验方法测定胃癌细胞系HGC-27细胞中肿瘤干细胞表面特异性抗体。结果 SP亚群占HGC-27细胞中的6％左右 ，维拉帕米阻断后减少为0.00％左右 。流式细胞仪分选出SP细胞8.5×105个，大部分为NSP细胞。克隆形成实验和MTT实验证实相关的SP细胞和NSP细胞增殖能力有差异。 磁珠筛选实验结果存在尚不能证实HGC-27细胞中存在肿瘤干细胞相关特异性抗体 结论 人胃癌细胞系HGC-27细胞中存在相关的SP亚群细胞，维拉帕米可抑制染料外排而明显减少SP细胞的比例。可以通过流式细胞仪分选出相关的SP细胞，通过克隆形成实验和MTT实验检测相关的SP和NSP细胞增殖能力有差异。但尚需从分子水平证实胃癌细胞SP细胞相关干细胞特异性。 [关键词] 胃癌； 肿瘤干细胞；HGC-27细胞； SP亚群；磁珠筛选 Isolation and identification cancer stem cells in human gastric cancer cell line HGC-27 *GAO Ganglong, ZHANG Xueli, SUN Zhengliang, LIU Wenyong, ZHANG Ping, YE Dongxia. *Department of General Surgery, The Fengxian Central Hospital, Shanghai 201400, China [Abstract] Objective To identify the ratio of the side population(SP)of cancer stem—like cells in gastric Cancer Cell Line human gastric cancer line(HGC)-27 and separate the SP and non side population (NSP)cells; To Initially Identify whether the SP cells have some stem-cell bionomics. Methods HGC-27 tumor cells suspension was stained with Hoechst 33342 and propidium iodide(PI) in the absence or presence of verapamil．Then the SP was analyzed in the fluorescence，activated cell sorter. To separate the SP and NSP cells by the fluorescence，activated cell sorter To detect the differences of SP and NSP cells by colon forming and cell growth plot experiment; to detect if gastric cancer cell line HGC-27 cells have the cancer stem cell relevant surface specificity antibody by using magnetic activated cell sorting system Results SP cells accounted for 0.00%—6％ of the HGC-27 cells．which were decreased to 0 by treating with verapamil. 8.5×105 SP cells