降血压肽前体的设计和克隆及其在大肠埃希菌中的表达.pdfVIP

· 1236 · 医堂 塞生芏 望 笠 鲞 第12期 JMedPostg vo1．23，N。．12．DecemI ．2010 论 著 (基础研究) 降血压肽前体的设计和克隆及其在大肠埃希菌中的表达 饶胜其，徐珍珍 ，杨严俊 [摘要】 目的 降血压肽 (antihypertensivepeptide，AP)是一类能降低人体10爪【的小分子肽，是血管紧张素转换酶抑制剂 (angiotensinconveringenzymeinhibitor，ACEI)，可通过抑制体 内血管紧张素 Ⅱ的生成达到降低 压的}={的。AP通常含有少数 儿个氨基酸残基，难 以直接表达，L六J此艾中设计含多种降斥活性肽段的AP前体(anfihypertensivepeptillpecusor ， APP)，构建 原卡发表达载体， 在所构建的基因]二程菌进行表达 方法 筛选多种已报道的具有高体 内降压活性的AP, 经 胃肠消化酶酶 切位点串联成APP 基于大肠埃希菌偏爱密码子，人 合成相直的多肽基 (app)，PCR扩增 ， 克降至表达载体 pET一22l，转化 E．co以BL21感受态细胞。重组质粒经双酶切和DNA测序鉴定，并用异丙基一31一D一硫代半乳糖甘 (soflr【}JvlB—D一1一thi，gla(t0pr． anoside，IPTG)诱导表达重组 APP： 结果 APP基因正确克隆至表达载体 pET一22b巾。诱导表达产物经 SDS—PAGE分析 ， 示 相刘分子质量 l1000处 现条带，与预期的重组 APP大小相符。 结论 人工没计的 ^PP孑F大肠埃希菌 巾获得成功 表达 ，为 AP的工业化制备打 基础 。 [关键词】 高血压；降flfL 肽；降血压肽前体；表达 [中图分类号] Q78 [文献标志码] A [文章编号] 1008—8199(2010)12-l236—04 DesignofantihypertensivepeptideprecursoranditscloningandexpressioninEscherichiacoli RAOSheng—qi，XUZhen—zhen，YANGYan—ju“ (Statelle)LaboratoryofFoodScienceandTechnology，SchoolofFoodScienceandTechnology， n 小znUniversit)一， Wuxi214122，Jiangsu，China) [Abstract] 0hjective Antihypertensi~epeptide(AP)，akindotsmallmoleculepeptide，istheinhibitorot’a i()tensin(0n— Yertingenzyme(ACEI)，whichcandecreasethebloodpressuret／)inhibitingthefurmationofangiutensin]]i io．APisr1】【teasvt()berli— rectlyexpressedbecauseofitssmallmolecularmass．Theobjectiveofthisstudyistodesignanantihypertensivepeptideprecursor(APP) eontainingnlanykindsofAP，constructitseukar voticexpressionvectorandexpresstherecombinantAPP itgel『eticenginee