亚栖热菌产海藻糖合酶培养基的优化.pdfVIP

第 2008年2月41卷 第 1期 Acta Scie tiarum Naturnlium U南 开大 学 学 报(自然科学版) rsitatis Na knlensis V01．41 N91 Feb．2008 文章编号：0465—7942(2008)01—0027—06 亚栖热菌产海藻糖合酶培养基的优化 陈晓云， 张 峻， 陈 颖， 齐 欣， 魏雪生 (天津市园艺工程研究所，天津 300384) 摘要：对亚栖热菌CBS一01菌株发酵生产海藻糖合酶的培养基进行了优化．首先通过碳源、氮源实验，选出 了适宜的碳、氮源，随后采用Plackett—Burman设计法对培养基中的组分进行了筛选，找出影响产酶的主要因素 为蛋白胨和酵母膏，最后利用中心组合设计及响应面分析法求出了主要影响因素的最佳浓度，得到优化的发酵 培养基配方(g／L)：可溶性淀粉5，蛋白胨8．6，酵母膏1．725，NaNO。0．7，氨三乙酸0．5，Na。HPO 0．1，MgSO · 7H。O 0．2，CaC1。0．1．10 L罐发酵实验表明，CBS—Ol菌株海藻糖合酶的合成属生长关联型，利用优化的发酵培 养基，CBS一01菌株的产酶水平由0．2 U／mL提高到0．41 U／mL． 关键词：亚栖热菌；海藻糖合酶；Plackett—Burman设计；响应面分析法 中图分类号：Q936 文献标识码：A 0 引 言 海藻糖广泛存在于低等植物、藻类、细菌、真菌、酵母、昆虫及无脊椎动物中，既是一种贮藏性糖类，又 是应激代谢的重要产物，能够在高温、高寒、干燥失水等恶劣的条件下在细胞表面形成特殊的保护膜，有效 地保护生物分子结构不被破坏，从而维持生命体的生命过程和生物特征，在食品、化妆品、分子生物学、医 学和农业等领域拥有广阔的应用前景 卅]． 20世纪90年代初，海藻糖的制备方法主要是提取法和微生物发酵法，但随着一些可生成海藻糖的新 型酶制剂的发现，酶催化法成为研究的热点．如，1993年日本林原生化研究所的科研人员首次从节杆菌中 发现两种新酶——麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶，利用这两种酶的协同作用，最先 取得了以淀粉生产海藻糖的技术_3]．1995年，该所的科研人员在脂肪杆菌、恶臭假单胞菌和水生栖热菌等 微生物体内又发现了一种新酶一麦芽糖一海藻糖转化酶(又称为海藻糖合酶) ]，该酶可催化麦芽糖发生 分子内转糖苷反应，即由a一1，4键转变为a一1，1键，从而可将麦芽糖转化为海藻糖，是大规模制备海藻糖的 另一个新途径． 酶催化法得以实现的前提是获得有关的酶制剂，但目前无论国内还是国际市场均无相关的酶制剂商 品出售．本实验室筛选出一株产海藻糖合酶的嗜热菌一亚栖热菌CBS一01菌株，该菌所产海藻糖合酶在 pH4．5~pHlO范围内稳定，最适反应温度为50～65 oC_5]，具有工业应用前景．本文旨在对CBS—O1菌株发 酵生产海藻糖合酶的培养基进行优化，研究中首先采用单因素分析及Plackett—Burman设计法对发酵培 养基中影响产酶的因素进行筛选，确定影响产酶的主要因素，然后用响应面分析法对筛选出的主要影响因 素进行中心组合设计，得到优化的发酵培养基，最后利用 10 L全自动发酵罐考察CBS一01菌株在优化培 养基中的发酵动态，为海藻糖合酶的发酵制备提供依据． 1 材料与方法 1．1 菌种 亚栖热菌(Meiothermus sp．)CBS一01菌株，本实验室筛选． 收稿日期：2007—03—15 基金项目：天津市自然科学基金(0336O5411)；天津市重点新产品计划(0439117l1) 作者简介：陈晓云(197O一)，女，助研，主要从事食品生物技术研究． ·28· 南开大学学报 (自然科学版) 第41卷 1．2 主要试剂 麦芽糖、海藻糖，Sigma公司． 1．3 培养基 1．3．1 斜面保存培养基：蛋白胨1 g，酵母膏1 g，氨三乙酸100 mg，CaSO ·2H O 60 mg，MgSO ·7H O 100 m