大学分子生物学：DNA的复制-32.pptVIP

DNA的复制 God said to them: “Be fruitful and multiply！” —《圣经·创世纪》 第一节 DNA复制概貌 一、DNA复制的半保留性 二、复制过程中的顺序性 复制从原点开始 边解链边复制 为什么不采取先将DNA全部解链， 然后再分别进行复制的方法？ 三、DNA的半不连续复制 第二节 DNA的复制酶和相关蛋白 一、DNA聚合酶 种类： DNA聚合酶I：1956年，Kornberg 具有聚合酶、3 ′-5 ′外切核酸酶、5′-3 ′外切核酸酶活性 主要生理功能：主要的DNA修复酶，并参与半保留复制 Roger, Kenneth, Sylvy, Arthur and Thomas. DNA聚合酶II：没有5′-3 ′外切核酸酶活性， 次要的DNA修复酶 DNA聚合酶III：是真正的DNA复制酶 多亚基 多层次组装 DNA聚合酶IV和V：参与SOS修复 DNA聚合酶III的结构： α DNA聚合酶 ε 3’-5’核酸外切酶 θ 激活ε外切酶活性 τ 使核心酶结合为二聚体；结合γ复合物 γ 结合ATP δ 与β亚基结合 δ’与γ和δ亚基结合 χ 与SSB 蛋白结合 ψ 与χ和γ亚基结合 β sliding clamp（滑动夹环） 二、解螺旋酶(helicase)： A helicase is an enzyme that uses energy provided by NTP hydrolysis to separate the strands of a nucleic acid duplex 四、引发酶(primase): The primase is a type of RNA polymerase that synthesizes short segments of RNA that will be used as primers for DNA replication. 为什么DNA的合成需要RNA引物？ 五、旋转酶(gyrase )： a Type II topoisomerase, acts to overcome the torsional stress imposed upon unwinding by introducing negative supercoils at the expense of ATP hydrolysis. 复制叉前进带来扭曲张力 拓扑异构酶II：引入负超螺旋 六、DNA连接酶（DNA ligases ） DNA ligase makes a bond between an adjacent 3’-OH and 5’ -phosphate end where there is a nick in one strand of duplex DNA . 1、酶活化 2、AMP转移 3、3′-OH亲核攻击 第三节 DNA的复制过程 一、原核生物的复制（E.coli） （一）复制的起始： 复制原点：Ori C，含两个系列的重复单位，3个13bp重复序列（富含AT），和4个9bp重复序列（识别位点） 起始过程： The origin is initially recognized by DnaA that forms a large complex with DNA. A short region of A·T-rich DNA is melted. DnaB is bound to the complex and creates the replication fork. The first nucleotides of the new chain are synthesized into the primer （二）复制的延伸： 复制体：酶和相关蛋白在复制叉形成的超分子复合物 （三）、复制的终止： 环形DNA： 单向复制：复制终点＝复制起点 双向复制： 无固定终点,两个生长点简单碰撞 有固定终点,如E.Coli 线性DNA： 环化，如λ DNA 形成连环分子，如T7 DNA 二、真核生物的复制 真核生物复制特点： 复制速度慢 基因组较大，有多个复制起点 在全部复制完成以前，起点不开始新一轮复制 真核生物DNA聚合酶： 复制过程中的核小体 复制叉前进是核小体解离为H32·H42 四聚体和 H2A·H2B 二聚体 新合成的组蛋白也被组装成H32·H42 四聚体和 H2A·H2B 二聚体 旧的和新的四聚体、二聚体，在CAF-1因子的帮助下，随机地被组装到复