第四章--微生物的营养和培养基.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 鉴别性培养基 常用染料 碱性染料：苏木精、亚甲蓝、碱性品红 碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷 酸性染料：伊红、坚牢绿、橙黄G 酸性染料电离时，其分子的染色部分带负电荷 在培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能使该菌菌落与外形相似的其它菌落相区别的培养基。 * 一 些 鉴 别 培 养 基 * 伊红美蓝（EMB）培养基鉴别机制 伊红系酸性染料 美蓝为碱性染料 碱性时二者不发生反应，在低酸度时，两种染料结合形成沉淀，起产酸指示剂的作用 * * * 思考题 1、微生物的营养要素及营养类型？ 2、物质进出细胞的主要方式？ * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2．促进扩散：溶质的运送过程中，必须借助于膜上的特异性载体蛋白的协助，但不消耗能量，顺浓度梯度进入细胞的方式。 特点 ①不消耗能量 ②参与运输的物质本身的分子结构不发生变化 ③不能进行逆浓度运输 ④运输速率与膜内外物质的浓度差成正比 ⑤需要载体参与 * 促进扩散模式图 细胞膜 细胞膜外 细胞膜内 恢复原构象 移位 再循环 结合 构象改变 * * 3．主动运输 　　指一类须消耗能量并通过细胞膜上特异性载体蛋白构象的变化，而使膜外环境中低浓度的溶质运入膜内的一种运送方式。 广泛存在于微生物中的一种主要的物质运输方式。 * 特点 需要消耗代谢能； 需要载体（渗透酶）参与； 运输方向是由胞外向胞内，逆浓度梯度方向进行； 扩散没有动态平衡点； 对被运输的物质具有高度的选择性（立体专一性）； 运输的物质种类丰富，大多数氨基酸、糖类和一些离子。 * 主动运输模式图 细胞膜 细胞膜外 细胞膜内 恢复原构象 移位 再循环 结合 构象改变 ADP+Pi ATP * 4．基团移位group translocation 　　也是一种既需特异性载体蛋白又须耗能的运送方式，但溶质在运送前后会发生分子结构的变化，不同于上述的主动运送。 运送1个葡萄糖分子，消耗1个ATP的能量，两步进行： 1）热稳载体蛋白的激活； 2）糖分子被磷酸激活→磷酸糖→细胞质中 机制：磷酸烯醇式丙酮酸--磷酸糖转移酶运输系统（PTS），PTS 通常由五种蛋白质组成，包括酶I、酶II（包括a、b、c三种亚基）和一种低相对分子量的热稳定蛋白质（HPr）。 * 细胞内高能化合物磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）的磷酸基团把HPr激活。 酶I PEP+HPr 丙酮酸+P-HPr HPr是一种低分子量的可溶性蛋白，结合在细胞膜上，具有高能磷酸载体的作用。 运送步骤 1、热稳载体蛋白(HPr)的激活 * 膜外环境中的糖先与外膜表面的酶II结合，再被转运到内膜表面。这时，糖被P-HPr上的磷酸激活，并通过酶II的作用将糖-磷酸释放到细胞内。 酶II P-HPr+糖 糖-P +HPr 2、糖被磷酸化后运入膜内 * 酶Ⅱc 酶Ⅱb 酶Ⅱa HPr 酶I * * 第四节　培养基 培养基(medium)是人工配制的，含六大营养要素，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合营养料。 培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础 六大营养要素： 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理； * 一、选用和设计培养基的原则和方法 (一) 、4个原则 目的明确 营养协调 理化条件适宜 经济节约 * 常见的培养四大类微生物的培养基 细菌（牛肉膏蛋白胨培养基）： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g H2O 1000ml 放线菌（高氏1号） 淀粉 20g K2HPO4 0.5g NaCl 0.5g MgSO4.7H2O 0.5g KNO3 1g FeSO4 0.01g H2O 1000ml 酵母菌(麦芽汁培养基) 干麦芽粉加四倍水，在50℃--60℃保温糖化3-4小时，用碘液试验检查至糖化完全为止，调整糖液浓度为10。巴林，煮沸后，沙布过滤，调PH为6.0。 霉菌（查氏合成培养基） NaNO3 3g K2HPO4 1g KCl 0.5g MgSO4.7H2O 0.5gFeSO4 0.01g 蔗糖 30g H2O 1000ml * 2.营养协调 　　谷氨酸的发酵生产： 当C/N=4时，菌体大量繁殖，Glu积累少；