B7-H3基因沉默联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株Patu8988t生长影响及机制实验的研究.pdfVIP

B7-H3 基因沉默联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株Patu8988t 生长影响及机制的实验研究 中文摘要 B7-H3 基因沉默联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株 Patu8988t 生长影响及机制的实验研究 中文摘要 第一部分 人B7-H3 分子siRNA 的设计及siRNA 转染条件优化 目的：设计并化学合成人B7-H3 基因的小分子干扰RNA，并进一步优化转染人 胰腺癌Patu8988t 细胞的条件。 方法： 遵循RNA 干扰目标序列的选取原则，利用互联网资源对人B7-H3 基因 mRNA 序列设计4 条小干扰RNA（siRNA）。以阴性荧光素特异性siRNA 为报告基因， 通过脂质体Lipofectamine2000 转染人胰腺癌Patu8988t 细胞，利用荧光显微镜计数观 察转染效率，CCK-8 法检测转染后对人胰腺癌Patu8988t 细胞的毒性。 结果： 成功设计并合成4 对人B7-H3 基因的小分子干扰RNA，在96 孔板中筛 选出最优化的转染条件为0.125µL Lipofectamine2000 和5pmol siRNA。 结论：成功设计并合成了人B7-H3 基因的小分子干扰RNA，同时优化的最佳转 染条件为进一步研究人B7-H3 小干扰RNA 功能提供了条件。 关键词：B7-H3 ；胰腺癌；脂质体；小干扰RNA ；转染 第二部分B7-H3 小干扰RNA 对人胰腺癌Patu8988t 细胞生长的影响 目的： 研究B7-H3 siRNA 对B7-H3 高表达的人胰腺癌Patu8988t 细胞增殖的影 响。 方法： 从化学合成的4 对小干扰RNA 中筛选出最佳的靶向B7-H3 siRNA 转染 人胰腺癌Patu8988t 细胞，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR ）和Western 印迹分别 从mRNA 和蛋白水平检测B7-H3 表达，CCK-8 检测B7-H3 表达被抑制后细胞增殖的 情况。 I 中文摘要 B7-H3 基因沉默联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株Patu8988t 生长影响及机制的实验研究 结果：B7-H3 siRNA 能在 mRNA 和蛋白水平下调人胰腺癌 Patu8988t 细胞中 B7-H3 基因的表达（P0.01 ）。B7-H3 表达被抑制后，细胞生长未受到明显抑制（P ＞ 0.05 ）。 结论： 沉默B7-H3 基因对胰腺癌Patu8988t 细胞生长无明显抑制作用。 关键词： 胰腺癌；RNA 干扰；小干扰RNA ；B7-H3 第三部分 B7-H3 siRNA 干扰联合吉西他滨对人胰腺癌Patu8988t 细 胞生长的影响 目的：研究B7-H3 siRNA 干扰联合吉西他滨对人胰腺癌细胞Patu8988t 生长的影响 方法：选择适合的GEM的干预浓度为10μmol/L 。设立空白对照组（B ）：未干预 空白细胞。GEM干预对照组（B+ ）：单纯GEM干预；联合干预对照组（NC+ ）：阴性 对照siRNA转染联合GEM干预；联合干预实验组（4+ ）：B7-H3siRNA转染联合GEM 干预。通过CCK-8法检测各组细胞增殖情况。应用Annexin-V/PI双染色法，检测各组 细胞早期凋亡情况。运用RT-PCR检测各组Caspase-3 mRNA 、Caspase-8 mRNA 、 Caspase-9 mRNA、Bcl-2 mRNA和Bax mRNA 的表达。并且应用Caspase活性试剂盒检 测各组的Caspase-3, Caspase-8 and Caspase-9酶活性。 结果：联合干预实验组细胞较其他对照组增殖明显减低（p ＜0.01 ）,其早期凋亡 比例为(25.83 ±0.95)%较GEM干预对照组 (18.6 ±0.76)%和联合干预对照组(20.30 ± 1.08)% 明显增高(P0.01) 。联合干预实验组的Caspase-3 mRNA, Caspase-8 mRNA, Caspase-9 mRNA 的表达较对照组明显上调(P0.05) ，其Cas