外周血细胞做为扫描电子显微镜标本的快速制备方法 a quickly and easy processing method to make the peripheral blood cell become applicable scanning electron microscope sample.pdfVIP

第32卷第4期 电 子 显微学报 V01．32．No．4 ofChineseElectron 2013_08 2013年8月 Joumal MicroscopySociety 文章编号：1000-628l(2013)04-0361_04 外周血细胞做为扫描电子显微镜标本的快速制备方法 张艾敬，曲宝清，张翠萍，孙异临+，徐如祥+ (北京市神经外科研究所北京军区总医院附属八一脑科医院，北京100700) 摘要：人外周血细胞形态特征的变化是诊断某些疾病的重要标志。扫描电镜观察血细胞表面的超微形态特点 可以为某些疾病的诊断提供重要信息。常规制样方法通过扫描电子显微镜观察舞蹈病红细胞、附红体红细胞等超 微结构步骤繁琐，耗时长。本文介绍了外周血细胞做为扫描电子显微镜标本的快速简便制备方法，可做为外周血 红细胞病变的一种快速诊断技术。 关键词：扫描电子显微镜；快速制备；血细胞；超微结构 文献标识码：A doi：10．3969／j．1000-6281．2013．04．015 中图分类号：R331．1；R361+．3；Q336 血细胞的形态特征及其体积、容积等细胞病理 伴言语不清，10年前上述症状加重，不能下地行走， 变化是对某些疾病诊断和研究的重要依据，红细胞 偶有吞咽困难，1年前出现右手抖动，为意向性震 占全血细胞成分的90％以上，它的变形能力对血液 颤，抖动于紧张时加重，睡眠时消失。核磁共振检 流变学有着重要的影响。在许多病理情况下，红细 查：脑萎缩。平衡功能检查：中度异常。扫描电镜下 胞的膜结构受到致病因素影响会产生形态的改变， 检查见棘状红细胞，比例约占6％。 如棘状红细胞增多症‘11。正常红细胞的形态为中 患者2：女性58岁，因“黄疸乏力”人院，入院后 央双凹的圆盘状，边缘较厚，直径约5～7恤m，胞膜 出现发热、黄疸加重。患者出现溶血性贫血。考虑 表面光滑。红细胞对其微环境的变化非常敏感，当 为附红体病。电镜下见红细胞胞膜表面出现0．5 细胞内离子浓度，ATP和膜骨架蛋白的结构发生变 mm左右的球形或不规则形小体。少部分红细胞膜 化时，细胞的形态就会发生改变，当人体受到某些疾 有钝圆的突起伸出，胞膜表面有少许空洞及纤细的 病侵害时可导致红细胞膜脂质双层的蛋白结构不稳 纤维物质附着。 定，从而使其发生病理改变，因此可为某些疾病的诊 1．2标本制备流程 断提供重要信息。常规制样技术对用扫描电子显微 取新鲜抗凝外周血1．0mL，按1：1比例直接滴 镜观察血细胞的超微结构特点需要的时间比较长， 入等量的固定液(4％多聚甲醛．2．5％戊二醛)4℃ 不能做为快速诊断的一种手段，本文作者在实验过 固定1h，离心弃去血清，用0．1mol／L二甲胂酸钠 程中摸索出一套简单快速的制样流程，大大缩短了 r／ 缓冲液吹打漂洗3次，(每次漂洗均需离心，200 制样时间，从而能快速、准确地观察血细胞的超微结 min，时间30s)，而后依次用50％．70％．90％的乙醇 构，为临床医生提供参考。 梯度脱水，吹散后，取细胞悬液滴在预先处理好的盖 玻片上(盖玻片上覆盖一层Fomvar膜)，30。倾斜盖 1 实验材料与标本制备方法 玻片。待标本干燥后，用HITACHIE．1010型离子 1．1实验材料