金属β-内酰胺酶综述.doc

金属类β-内酰胺酶 β-内酰胺酶是革兰阴性杆菌对内酰胺类抗生素耐药的主要机制，细菌产生的β-内酰胺酶大部分系活性部位带丝氨酸残基的酶类，也有一小部分是活性部位为金属离子的酶类，称为金属β-内酰胺酶（metallo-β-lactamase,MBL），简称为金属酶。金属β-内酰胺酶，属Bush分类3群，Ambler分类B类，该群酶最大特点是可以水解碳青霉烯类等抗生素，而对哌拉西林和氨曲南影响较小。酶活性中心需金属锌离子的参与而发挥催化活性，故称为金属β-内酰胺酶。底物为包括碳青霉烯类在内的一大类β-内酰胺抗生素，其活性不被常见的β-内酰胺酶酶抑制剂如克拉维酸等所抑制，但可被离子鳌合剂乙二胺四乙酸（EDTA）、菲咯啉或硫基化合物抑制所抑制。金属β-内酰胺酶可由染色体和质粒介导，可在铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、粘质沙雷菌、肠杆菌属菌、肺炎克雷伯菌、嗜水气单胞菌和不动杆菌、脆弱类杆菌属、等细菌中检出此类酶。 一、发现和分布 第一个报道的金属酶是从蜡样芽孢杆菌( Bacill us cereus) 中发现的，该酶为锌依赖酶。20 世纪80 年代初期日本从嗜麦芽窄食单胞菌中鉴定出第二种锌依赖青霉素酶L1 型酶，随后又从嗜水气单胞菌和脆弱拟杆菌中鉴定出多种能水解亚胺培南的金属酶。这些酶都由染色体基因编码。该类金属酶分布在蜡样芽孢杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、脆弱拟杆菌、气单胞菌属和戈氏军团菌中，除嗜麦芽窄食单胞菌外,在临床上都极为罕见,而且都是单株散发的。1991 年日本学者在铜绿假单胞菌中发现了第一种质粒介导的金属酶( IMP21)?，不久又从脆弱拟杆菌中发现了一种可转移金属酶，这两个酶的发现意味着金属酶已经从单株散发向随机分布过渡。现在已报道了10多种可转移金属酶: IMP21～8 和VIM21～3，分布在铜绿假单胞菌、不动杆菌和肠杆菌科细菌中，地域分布上已经不再局限于日本，现已分布至亚洲、欧洲和美洲的多个国家。 二、生化分类和生化性质 1995 年Bush 等将金属酶全部归入功能类型3群,主要分类依据为：能被金属螯合剂螯合不被β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦抑制。当时没有再作进一步分类。随着金属酶报道的增多1997 年Rasmussen 和Bush 将金属酶按功能分成三个亚群3a、3b 和3c 。 1) 3a 亚群 绝大多数金属酶属于3a 亚群。其特点是底物谱宽，水解青霉素的速度与水解亚胺培南的速度相近或更快，还能有效水解头孢菌素，因此，3a亚群金属酶是β-内酰胺酶中最危险的单一酶种。许多3a 亚群酶需添加Zn2+ 才能达到最大活性或被激活，提示该亚群与Zn2+的亲和力低。 2) 3b 亚群 分布于气单胞菌中包括亲水气单胞、杀蛙气单胞、温和气单胞和简达气单胞菌。特点是底物特异性高，优先水解碳青霉烯，弱水解青霉素(A2h 除外) 和头孢菌素不水解nitrocefin ，因此不能用nitrocefin 纸片法检出。等电聚焦电泳和凝胶柱层析时必须用亚胺培南作底物才能检测到。能被EDTA抑制，加EDTA 后，再加Z2+ 又可恢复酶活性。高浓度Zn2+ 可增加酶活性而在低浓度时酶活性受抑制。当Zn2+ 在15μmol 或更低时至少有3 种3b 酶的活性受抑制。 3) 3c 亚群 只有一种，来源于戈氏军团菌，至今尚未命名。能高效水解头孢菌素碳青霉烯。这三群金属酶不水解氨曲南，不被克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦抑制,水解较新的碳青霉烯的能力比水解亚胺培南弱(3a 亚群的Bacill us cereus Ⅱ和3b 亚群的AsbM1除外) 。 三、金属酶的分子生物学亚型分类法及分子生物学特点 Philippon等研究了金属酶的基因编码序列的多样性，根据其序列相似度的类型，将金属酶３a，３b两个亚群又进一步细分为３个亚类：B1、B2、B3。 1）B1亚群：包括了绝大多数已知的金属酶，蜡样芽胞杆菌产生的Ⅱ酶 （ＢｃⅡ），脆弱拟杆菌产生的 （又名），脑膜炎败血黄杆菌产生的酶 ，吲哚黄杆菌产生的１，在铜绿假单胞菌、黏质沙雷菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌中发现的类以及类都属于该亚型。 酶分子量在左右，其氨基酸同源性≥，有个组氨酸和个半胱氨酸残基参与活性部位和／或水分子的结合，其活性都能被所抑制，加入后能恢复活性，大多数由质粒介导。B1亚群金属酶都含有与酶的活性基团相关的个组氨酸和一个半胱氨酸。 ??（2）B2亚群：包括气单胞菌金属酶CphA、CphA2 及Imis本亚群与B1亚群的分子大小相近，但同源性低，两亚群间仅23个氨基酸相同（约11％）。 只有一个 活性位点，以碳青霉烯类作为底物。 ??（3）B3亚群只有一个来源于嗜麦芽单胞菌的L1酶。本亚群酶只有9个氨基酸与其它金属酶相同。L1酶的结构是四聚体，与其它金属酶显著不同（其它金属酶都是单体）。来自不