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LGT模型鼠血清及其癌组织提取液中蛋白质指纹比较探究作者单位：030013 山西省肿瘤医院（陈妍，裴毅）；山西省忻州市人民医院（杜秀玉） 通讯作者：裴毅 【摘要】 目的 分析比较LGT模型鼠血清与其肿瘤组织中危重患者预警（LGT-Lost Goodwill Target）蛋白指纹的表达特征。方法 取4～5周龄雌性小鼠1只，接种S180肿瘤细胞悬液（0.2 ml/只），建立小鼠S180肉瘤动物模型。肿瘤细胞株S180以腹水瘤形式在昆明（KM）小鼠体内传代，传代后第8天，无菌条件下抽取腹水并以生理盐水稀释，调整细胞密度 2×107/ml，制成肿瘤悬液，置于冰浴备用。将制备好的肿瘤细胞悬液以每只0.2 ml于昆明小鼠（10只）右腋下的皮下接种造模。建立小鼠S180肉瘤动物模型。随机分为造模组（A组，5只）及对照组（B组，5只），肿瘤长至0.5 cm大小时，开始给予造模组（A组）腹腔注射顺铂5.2 mg/kg，连用4 d；同天给予空白对照组（B组）腹腔注射等计量生理盐水，连用4 d。于造模结束后第3天两组小鼠全部摘眼球取血，分离血清进SELDI 检测，解剖造模组小鼠，分别取瘤组织、瘤旁组织及正常组织各1 g，匀浆，抽取上清液行SELDI检查。并利用Biomarker Wizard 软件对各组血清及瘤组织、瘤旁组织及正常组织匀浆液的蛋白质组指纹图谱进行比较分析。结果 （1）A组血清LGT蛋白质组指纹阳性，B组血清LGT蛋白质指纹阴性。造模成功，A组可行进一步分析。（2）A组血清与癌组织液LGT相关蛋白质指纹图谱：有8个蛋白质差异有统计学意义（P 【Key words】 Model rat; SELDI-TOF-MS; LGT-Lost Goodwill Target 人类肿瘤蛋白质组的研究是目前恶性肿瘤研究的重要方法之一。裴毅等［1］于2004年应用SELDI技术从146例肿瘤患者在不同肿瘤情况下、不同病情发展阶段的动态血清蛋白质组的质谱中，捕捉到了一组促进肿瘤患者病情恶化的异常蛋白质组［2］，2005年通过省科技鉴定，认为蛋白质指纹是一个原创发现［3］。用SELDI证实该蛋白质指纹对肿瘤患者的病情演变和死亡发生有预警作用［4］。2007年完成表达LGT蛋白质动物模型的构建（鉴定专利：200710087535.7），证明了该蛋白质的存在［5］。 危重病人预警（LGT-Lost Goodwill Target）蛋白指纹模型鼠组及空白对照组，经SELDI技术分别检测小鼠的血清，造模组血清LGT蛋白质组指纹阳性，空白对照组血清LGT蛋白质指纹阴性。进一步对造模组小鼠瘤组织、瘤旁组织及正常组织匀浆后，匀浆液行SELDI检查，观察各组LGT蛋白质组指纹，并就其相关性进行比较。现报道如下。 1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 瘤源 S180肉瘤瘤株，由中国药品制品鉴定所引进。 1.1.2 实验动物 4～5周龄雌性昆明种（KM）小鼠，共10只，体重为19～22 g，购自于山西省肿瘤医院研究院动物实验室。 1.1.3 试剂和仪器 三氟乙酸、SPA、CHAPS、乙腈、尿素、Tris-HCI。ProteinChip Bioloy System（PBS）质谱仪、弱阳离子交换型（CM10）蛋白质芯片均购自Ciphergen Biosystems公司。 1.2 实验方法 1.2.1 接种造模 取4～5周龄雌性小鼠1只，接种S180肿瘤细胞悬液（0.2 ml/只），建立小鼠S180肉瘤动物模型。肿瘤细胞株S180以腹水瘤形式在昆明（KM）小鼠体内传代，传代后第8天，无菌条件下抽取腹水并以生理盐水稀释，调整细胞密度 2×107/ml，制成肿瘤悬液，置于冰浴备用。将制备好的肿瘤细胞悬液以每只0.2 ml于昆明小鼠（10只）右腋下的皮下接种造模。 1.2.2 分组及给药方法 接种24 h后随机分组。分为两组：A组造模组（n5），腹腔注射顺铂5.2 mg/kg，连用4 d；B组空白对照组（n5），腹腔注射等计量生理盐水，连用4 d。 1.2.3 样品收集 于造模结束后第3天两组全部给予小鼠摘眼球取血分离血清进SELDI 检测，对造模组小鼠进行解剖，分别取瘤组织、瘤旁组织及正常组织各1 g，按0.5 g组织加入1 ml生理盐水，用电动匀浆器匀浆，3000 r/min离心5 min分离组织液，抽取上清液行SELDI检查。并利用Biomarker Wizard 软件对各组血清及瘤组织、瘤旁组织及正常组织匀浆液的蛋白质组指纹图谱进行比较分析。 1.2.4 血清样本的制备 将小鼠用2%戊巴比妥钠麻醉，摘眼球取血后，立即放入4 ℃冰箱静置30 min。随后4 ℃ 300