人体表皮神经构筑探究进展.doc

人体表皮神经构筑探究进展皮肤感觉神经来自脊神经,为有髓神经,从浅筋膜到达真皮乳头,脱髓鞘后进入表皮及靶组织。进入表皮层的神经,分支并穿过表皮各层伸向角质层构成表皮神经(epidermal nerve)。由于表皮神经异常纤细,研究相对缓慢,随着研究的进展,表皮神经的作用越来越受到重视,本文就表皮神经的研究进展综述如下。 1表皮神经研究方法 1.1 研究方法历史沿革:早在1868年,Langerhans 用Cohnneim’s金氯化物法染色最早描述了表皮神经的存在,此后关于表皮神经存在与否争论一百多年。1954年,Weddell用亚甲蓝灌注法研究,肯定了表皮神经的广泛存在,是真皮神经干发出的轴浆丝,以前大多数研究者没有认识到表皮神经纤维是裸露的,很容易被破坏。直到1990年,Wang 等[1-2]运用免疫组织化学染色的方法详细地描述了皮肤真皮和表皮神经的构筑,至此人们对神经的完整构筑有了一个较为可靠的研究方法,有了正确的认识。表皮神经分为肽能神经和非肽能神经,肽能表皮神经为NGF免疫阳性,表达降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide ,CGRP)、SP及酪氨酸激酶A(trkA)受体(NGF特异性受体);非肽能神经为神经角质细胞来源的神经生长因子免疫阳性,表达GDNFRα和P2X3受体[3]。 1.2 研究方法 1.2.1 取材:常用的取材方法有疱皮法和环钻钻取法(punch biopsies),具有损害性小,可重复性好,容易接受的优点[4],可以从研究对象皮肤取3mm大小的组织,然后进行免疫组织化学研究。研究表皮神经往往需要较厚的切片,常见厚度有3～30μm石蜡切片或者10～100μm冰冻切片,对于较厚的切片需要应用漂浮法免疫组织化学染色,以利于抗体的浸入。 1.2.2 抗体:人们对表皮免疫组织化学研究常利用标记物有轴突胞浆成分(蛋白基因产物9.5 protein gene product 9.5,PGP9.5),特殊细胞骨架成份(NF70或NF200,β微管蛋白,微管相关蛋白MAP1B),神经肽类(SP、CGRP、神经激肽A)存在于感觉神经,大多分布在表皮基底层或者真皮层。表皮层的神经标记物还有瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1),其主要表达于表皮C神经纤维。对于非肽能神经纤维可以采用P2X3受体或其同工凝集素IB4。但是就目前发表的论文看,PGP9.5是最常用的标记物[3]。 1.2.3观察方法:免疫阳性的表皮神经可以通过光学显微镜、荧光显微镜及共聚焦显微镜观察。激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocalmicroscope,LSCM),具有图薄层光学切片功能,通过荧光分子获得信号,获得标本三维数据,经计算机图像处理及三维重建软件产生三维效果,从而能灵活、直观地进行形态学观察[5]。近来,Tamura 等[6]将天文学上用于分析很小的银河外星系图像的一种计算机检测(Computerized detection method,CDM)软件用来分析LSCM获取的基底膜以内的神经图像,认为其具有经济、快速、可重复性高的优点。 1.3 神经密度的测定:神经构筑的密度反应了初级神经元投射到中枢次级神经元的密度。由于真皮内的轴索密集成束,所以目前用比例尺度定量分析局限于表皮内。近期多选择全神经标志物抗PGP9.5抗体作为一抗进行免疫组织化学染色。共聚焦激光显微镜或者图像分析仪对神经计数神经纤维数量:表皮内有分支的神经纤维作为一个计数,在表皮基底膜下就分支的每个分支单独计数;表皮面积=测量的每个切片表皮长度×切片厚度,表皮神经密度=神经轴索计数总数/面积(mm2)。也有将密度表示为线性密度,即神经轴索数/表皮长度。可以用免疫荧光双标技术将真-表基底膜及表皮神经显示后用图像分析仪分析,将染色阳性的神经构筑区域与表皮表面区域(由基底膜表示)相比,计算出百分数作为密度[7]。活检检测表皮神经密度被认为是检测小神经病变的理想方法,较传统的神经学检测更客观、敏感[8],近年来用于多种小神经纤维病损的检查(糖尿病[8],结节病[9],遗传过敏性皮炎[10]等)。 2表皮神经的形态学 有髓的感觉神经,从浅筋膜到真皮乳头层发出各级神经丛,构成神经树,皮肤神经树分支与皮肤微循环血管树的分布、走行有许多相似之处,具有显著的立体结构特征[11]。一般划分为五层,皮神经干、浅筋膜层、真皮深层、乳头层,最后末梢伸向表皮。其终末分支广泛分布于皮肤的各层,包括游离神经末梢和特殊神经末梢。 2.1游离神经末梢:一般呈细小树枝状分支。健康对象皮肤表皮神经纤维起于乳头下神经丛,伸向角质层分支或者进入角质层少许,呈树状分支或不分支,神经纤维通常是纤