北芪精口服液制备工艺探究.docVIP

北芪精口服液制备工艺探究材料与方法 药材来源：膜夹黄芪，购于内蒙古。 试药与试剂：黄芪甲苷对照品。 仪器与设备：ShimadzuLC-6A高效液相色谱仪，C-R4A数据处理机，DU-70分光光度计(Beckman公司)。 处方：北芪精口服液处方是由单味药黄芪构成，其中添加炼蜜(椴树蜜)、纯化水、乙醇、香精、柠檬酸钠、山梨酸钠等辅料制成。 提取工艺试验设计：根据黄芪甲苷的理化性质及中药材传统的提取经验，确定考察因素为药材浸泡时间(A)，加水量(B)，煎煮时间(C)和煎煮次数(D)，每个因素确定了3个水平。 药材的提取：用天平取净黄芪饮片50g，置于加盖的铝锅中，按正交实验表设计的方法，浸泡A小时，B倍量的水，煎煮C小时，煎煮前D次进行试验。水煎液过滤，滤液浓缩至适宜体积后，用95%乙醇醇沉3次，第1次使滤液含醇量达到45%，放置48小时，取上清液，过滤，滤液回收乙醇；第2次使滤液含醇量达到60%，放置24小时，取上清液，过滤，滤液回收乙醇；第3次滤液使含醇量达到75%放置24小时，取上清液，过滤、滤液回收乙醇，浓缩，定容于500ml容量瓶子，备用。(根据试验所设计的浸泡时间，煎煮时间、煎煮用水量及煎煮次数，按此方法每项分别进行3次试验，结果取平均值。) 黄芪甲苷含量测定：根据文献报道黄芪苷的测定方法，有比色法[1]薄层层析±紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法(HPLC)[2]、反相高效液相色谱法。笔者采用高效液相色谱法(HPLC)测定黄芪甲苷的含量[2]。 供试品溶液的制备：用移液管精密量取药液20ml，置分液漏斗中，加入氢氧化钠1g，振摇使之溶解，用正丁醇提取3次，每次量为20ml，合并正丁醇层，正丁醇液水浴蒸干，用甲醇溶解，并转入5ml溶量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。过滤，取续滤液作为供试品溶液。 对照品溶液的制备：用分析天平精密称取黄芪对照品5.0mg，用甲醇溶解，制成每1.0000mg/ml的溶液。 色谱条件与进样分析：Shimpack CLC-ODS色谱柱(150mm×6mm，5μm，id)；流动相为乙腈-水(35：65)，流速1ml/分；柱温35℃；检验波长203nm，灵敏度0.08AUFS。精密吸取对照品溶液20μl及供试品溶液10μl或20μl，注入高效液相色谱仪，以外标法计算含量。在上述色谱条件下，滤液中黄芪甲苷与其他成分分离较好，阴性对照品无干扰。 线性关系的考察：用分析天平精密称取黄芪对照品，取2.080mg、4.161mg、8.322mg、12.48mg、16.64mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，配制成0.208、0.416、0.832、1.248、1.664mg/ml的5种浓度的溶液。分别精密吸取20μl注入高效液相色谱仪，每种浓度进样3次，以峰面积(A)对进样量(C)进行线性回归，得回归方程：A=-542.9+6857.2C，r=0.9998。在进样量4.16～33.28mg范围内线性关系良好。 回归率的测定：用分析天平精密称取9份已测定浓度为1.002mg/ml的黄芪甲苷溶液，加入一定量的水使总体积为20ml。分别加入黄芪甲苷对照品1mg，按上述方法制成供试品溶液，测定，计算，得平均回收率为98.14%，RSD=1.80%(n=9)。 提取结果分析：经过试验得出加水量的多少对提取效果的影响小，而且加4倍量的水会增加生产成本，因此考虑加2倍量的水，比较经济。但经过综合恒量得出最佳的提取工艺应为，加水浸泡4小时，每次加入药材3倍量的水，每次煎煮45分钟，煎煮3次。从最佳提取条件所提取的结果看，黄芪甲苷的含量约为0.18%，高于药典所规定的0.04%。所以此提取工艺具有较强的科学性，为今后的工艺改革提供了有利的依据。 对黄芪多糖含量的考察：一是为了证明上述试验的有效性，二是为今后提高北芪精口服液的质量标准提供依据。试验[3]采用分光光度法。 标准溶液配制：用分析天平精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，定容于100ml容量瓶中，摇匀。移取10.0ml，以蒸馏水定容于100ml容量瓶摇匀，得到0.1mg/ml标准溶液。 苯酚溶液配制：分别吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml于25ml比色管中，加蒸馏水至刻度，混匀。并移取该溶液2.0ml于比色管中，加入苯酚溶液1.0ml，摇匀，迅速加入浓H2SO45.0ml，摇匀，放置5分钟，置沸水浴中加热15分钟，迅速冷却至室温。另以2.0ml蒸馏水作空白对照。在490nm波长处测定吸光度，线性回归方程C=447A-5505，r=0.9954，并绘出回归曲线(C：mg/ml)，即为标准曲