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天然产物有效成分分离纯化新技术及应用
天然产物有效成分分离纯化新技术及应用摘要:对中药有效成分的分离纯化新技术及其特点与应用作一综述。
关键词:中草药;有效成分;分离;纯化
中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1672-979X(2007)09-0063-03
天然产物是药物研发中极具潜力的原料资源,分离纯化天然产物中具有独特生物活性的物质是中药研究的重要基础工作。天然产物有效成分复杂,含量低,难于富集,用传统的分离方法不仅步骤繁琐,能源及材料消耗大,而且产率及纯度不高,尤其难以分离结构和性质相似的组分。随着中药现代化的发展,高新技术不断在中药制药工业中推广应用。现将近年天然产物分离纯化新技术的进展作一综述。
1 高速逆流色谱分离法
近年高速逆流色谱分离法(high-speed counter current chromatography,HSCCC)在天然药物研究领域独具特色。它是应用动态液-液分配原理,螺旋管的方向性与高速行星式运动相结合,分离具有不同分配比的样品组分[1]。目前HSCCC仪有制备或半制备型和分析型两种,其技术特点是适用范围广,分辨率高且重现性好。Du等[2]以正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(1∶4∶2.5∶2.5)为溶剂系统,从穿心莲中分离得到穿心莲内酯和新穿心莲内酯。王凤美等[3]用高速逆流色谱法制备丹酚酸B化学对照品,所用的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-水-甲醇(1.5∶5∶5∶1.5),一次分离可制备63.4 mg丹酚酸B,纯度为98.16%,同步完成复杂样品的分离、纯化和制备。
2制备高效液相色谱
制备高效液相色谱(preparative high performance liquid chromatography,PHPLC)具有灵敏度高、分析速度快、选择性强等特点,可一次性完成分离纯化和鉴定,广泛用于天然产物的分离制备。Cato[4]用色谱柱初步分离虞美人(Papaver rhoeas L.)花瓣的总生物碱,再用PHPLC进一步分离纯化,得到3种不同的异丽春花宁。Abreu[5]等用色谱纯化制备植物Sarcocephalus latifolius中的糖类物质,先将提出的糖混合物甲酰化,再用正相PHPLC,己烷-乙酸乙酯为流动相梯度(90∶10~10∶90)洗脱,分离出11个组分,再用PHPLC纯化每个组分,最终均得到纯品。
3大孔树脂和大网络树脂吸附分离技术
大孔树脂(macroporous resin)和大网络树脂(macroreticular resin)已广泛用于中药有效成分的分离与纯化,目前常用的吸附树脂为苯乙烯和丙烯腈型[6]。大孔吸附树脂为吸附和筛选相结合的分离材料,吸附容量大、选择性好、再生处理简单,特别适用于从水溶液中分离低极性或非极性化合物[7]。蔡雄等[8]考察了大孔树脂富集、纯化人参皂苷的吸附性能和洗脱参数。用蒸馏水100 mL,50%乙醇100 mL依次洗脱,人参总皂苷富集于50%乙醇洗脱液部分,洗脱率在90%以上,人参皂苷含量为60.1%。此法选择性好,除杂质能力强。杨献文等[9]研究了桔梗总皂苷的提取分离工艺,用ZTC21大孔吸附树脂,不同浓度乙醇洗脱提纯桔梗总皂苷,平均产率2.05%,操作简单、得率高、成本低。
4半仿生提取法
半仿生提取法(semi-bionic extraction method,SBE)是从生物药剂学的角度,模拟口服药物经胃肠道转运吸收的环境,采用活性指导下的导向分离方法。有效成分损失少、成本低、生产周期短。在对多个单味中药和复方制剂的研究中,半仿生提取法已显示出较大的优势和广泛的应用前景。张学兰等[10]在桂枝甘草汤(桂枝、甘草)的剂改优选提取工艺中比较了SBE法与水提法,结果显示,SBE法显著优于水提法。有学者建议将提取温度设为近人体温度,在提取液中加入拟人体消化酶活性物质,使提取过程更接近药物在人体胃肠道的转运吸收过程,更符合辨证施治的中医理论。
5膜分离技术
膜分离技术(membrane separation technique)包括半透膜、超滤膜、微孔滤膜、反渗透膜等,以原生物体系实现物质分离,高效浓缩富集产物,有效去除杂质[7]。由于其过程不发生相变,能耗低,分离效率高,适合分离热敏性和化学不稳定的药物。徐志红等[11]用磺化聚醚砜超滤膜分离纯化银杏黄酮粗提物,获得了较高质量分数黄酮的高纯银杏黄酮产品。刘洪谦等[12]用膜分离法精制生脉饮口服液,比较传统工艺与膜分离技术制备的成品质量,证明膜分离法能有效地保留原方配伍成分,产品稳定性优于传统工艺。
6分子蒸馏
分子蒸馏(molecular distillation,MD)是在高真空度下进行分离操作的连续蒸馏,可使分离混合物的
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