山楂中总三萜酸提取工艺优选.docVIP

山楂中总三萜酸提取工艺优选摘要：目的：优选山楂总三萜酸的最佳提取工艺。方法：以熊果酸含量和干浸膏得率为考察指标，应用正交实验设计筛选山楂总三萜酸的最佳提取工艺条件。结果：药材以8倍80%的乙醇加热回流提取1.5h。结论：优选的最佳提取工艺稳定可行。? 关键词：山楂；总三萜酸；正交试验；熊果酸? 中图分类号：R284.2文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)04-0774-02 山楂为蔷薇科植物山楂?(Crataegus pinnatifida Bge.)?的成熟果实,据报道其主要含有2类有效成分:山楂黄酮类和山楂有机酸类[1],有机酸中的总三萜酸是降血脂的活性成分[2-3]和抗肿瘤有效部位[4],其主要有效成分为熊果酸、齐墩果酸、山楂酸等三萜酸[1]。本实验以山楂中的总三萜酸作为考察指标，采用正交设计法对山楂提取条件进行优选，从而确定提取工艺的最佳条件。? 1仪器与试药? 1.1仪器DZF-150型数显自控可调真空干燥箱(郑州长城科工贸有限公司)；BUCHI R-114旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）；KQ-500 DE型医用超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；TU1800S型紫外分光光度计（北京普析通用仪器责任有限公司；HH-S电热恒温水浴锅（江苏省医疗器械厂）。? 1.2试药山楂药材购自安徽亳州，经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为(Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥成熟果实。熊果酸对照品：中国药品生物制品检定所（110742－200516）；乙醇为95%医用酒精，其余均为分析纯。? 2方法与结果? 2.1总三萜酸的含量测定[5]（以熊果酸为比色对照品） ①测定波长：经紫外扫描在546nm有最大吸收，空白无干扰。②对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品10.2mg，置100mL容量瓶中加无水乙醇溶解，并定容至100mL（102.0μg/mL），作为对照品溶液。③标准曲线的制备：精密吸取熊果酸对照品溶液无水乙醇液（浓度102.0μg/mL）0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分置具塞试管中，挥去溶剂，各加5%香草醛-冰醋酸溶液0.4mL，高氯酸1.0mL，60℃水浴15min，冰浴冷却，加冰醋酸5.0mL摇匀，在546nm波长处测定吸收度。结果见表1。 经回归分析，得回归方程Y=0.0065X-0.0222，相关系数r=0.9997，线性范围20.40～102.00μg/mL。? 表1熊果酸标准曲线 2.2稳定性考察取山楂粉末（40目）1.0g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇50mL提取6h，提取液回收乙醇；残渣加醋酸乙酯50mL回流3h，滤过，回收醋酸乙酯；残渣用无水乙醇溶解，离心，取上清液转移至50mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按上述方法测定吸光度，用无水乙醇做空白对照，每隔2h测一次吸光值。见表2。? 2.3生药的测定取山楂药材1g，精密称定6份，处理方法同前。根据标准曲线，计算山楂生药中总三萜酸的含量(以熊果酸计)。RSD为1.92%，结果见表3。? 2.4加样回收试验 取山楂粉末0.5g，精密称定6份，分别加入熊果酸1.46、1.46、1.82、1.82、2.18、2.18mg，处理方法同上，测定吸光度，每份测定2次。结果见表4。? 表4加样回收率试验结果 2.5工艺参数考察 为了全面考察醇提因素，本实验设计了3因素3水平的正交试验。通过用回流法对药材提取工艺过程中溶剂用量、提取次数、提取时间等因素的考察，研究提取工艺的最佳因素。实验方案见表5。? 实验方法：取山楂药粉2250g平均分成9份（每份250g），加入80%的乙醇依L?9（3?4）正交表的条件回流提取，滤过，收集滤液，60℃减压回收乙醇，真空干燥（60℃，-0.09MPa），准确称重，测定总三萜酸含量。实验结果见表6～表8。? 由表6可知，A?3 A?2 A?1,B?3B?2B?1,,C?3C?1C?2,Ｂ因素对总三萜酸转移率影响最大，A因素次之，C因素影响不大。直观分析表明，在A?3B?3C?2条件下总三萜酸的转移率及含量均最高，属较佳条件。方差分析结果表明，提取次数（B因素）有显著性影响应取B?３；提取时间（C因素）无影响，故提取时间定为C?1以节约工时；溶剂用量（A因素）影响较小，取A?1以节省成本。因此，最佳提取工艺条件为A?1B?3C?1。即每次以8倍量的80%乙醇，加热回流提取3次，每次1h。将此条件做重复实验，结果见表8，有效成分转移率平均为93.53%。? 药材中总三萜酸含量0.37%。? 从上面的结果可以看出，在A?1B?