山萸肉饮片高效液相指纹图谱探究.docVIP

山萸肉饮片高效液相指纹图谱探究摘要：目的：建立山萸肉饮片高效液相指纹图谱。方法：HPLC法。结果：建立了山萸肉饮片高效液相指纹图谱，不同产地不同批次山萸肉饮片HPLC指纹图谱相似度大于0.9。结论：HPLC指纹图谱可以用于山萸肉饮片质量的控制。 关键词：山萸肉；高效液相；指纹图谱 中图分类号：R248　文献标识码：A　文章编号：1673-7717(2007)11-2291-03 山萸肉为临床常用名贵中药，系山茱萸科植物山茱萸Comus officinalis sieb.et Zucc.的干燥成熟果肉，味酸、涩，性微温。归肝、肾经。具有补肝肾、涩精固脱的功能。山茱萸含有多种具有药用价值的物质，从果肉中分离得到的主要成分包括有机酸及其酯类、五环三萜及其酯类、环烯醚萜类、鞣质、多糖、维生素、氨基酸和矿物质等。目前认为山茱萸中所含的熊果酸、齐墩果酸、山茱萸苷、马钱素、没食子酸、莫诺苷等为其主要活性成分，具有降低血糖、增强免疫、利尿、降压、抗炎等药理作用。由于中药指纹图谱能够比较全面的反映中药所含化学成分的种类与数量，进而用于中药饮片的鉴别和质量控制。为此笔者建立山萸肉饮片高效液相指纹图谱，并对其进行分析和比较，用于控制山萸肉饮片质量。 1　仪器和试药 1.1　仪器 LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津)；柱子：岛津VP―ODS反相柱(250mm×4.6mm)；工作站：CBM-102(日本岛津)；检测器：SPD-20A(日本岛津)；检测波长：240nm；柱温：30℃；MKITLER　AE240电子分析天平(瑞士)；BS210S型电子天平(北京塞多利斯天平有限公司)。 1.2　对照品与试剂 马钱素对照品(北京格润得科技发展公司，含量97.8％)：莫诺苷对照品甲醇(天津市四友生物医学技术有限公司，批号：060307101)、乙腈(天津市四友生物医学技术有限公司，批号：051226101)为色谱纯，水为双蒸水；其余试剂均为分析纯。 1.3　样品 山茱萸药材分别采购于河南巩义、白云山、郏县、南召、西峡、南阳、宛西制药股份公司山茱萸公司等。经河南中医学院生药学科陈随清教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸Cot-mus officinalis sieb.et Zucc。 山萸肉饮片：取山茱萸药材，净选，去除残余的果核及杂质，60℃干燥后打粉备用。 2　实验方法和结果 2.1　供试品制备 2.1.1　供试品溶液的制备精密称取山茱萸样品粉末(过40目筛)0.5g，加甲醇20mL，水浴加热回流1h，滤过，药渣再同法提取两次，滤过，合并3次滤液，低温挥去溶剂后用甲醇溶解并定容至25mL，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，弃去初滤液约5mL取续滤液作为供试品溶液。 2.1.2　参照物溶液的制备分别取莫诺苷、马钱素对照品，精密称定，加甲醇配制成浓度分别为0.0215、0.0152mg／mL的溶液，作为参照物溶液。 2.2指纹图谱条件的确定 2.2.1　流动相梯度的选择实验过程中用：A0.1％磷酸乙腈、B0.1％磷酸水溶液，不同比例分别进行，依据峰分离效果最后选定梯度：0～5min A(93％～93％)，5～25(93％～85％)，25-45(85％～80％)，45～60(80％～80％)梯度最佳，因此选此流动相梯度系统作为山茱萸饮片的HPLC指纹图谱检测的流动相。 2.2.2　波长的选择用不同波长在谱图上检测，结果各个色谱峰在检测波长为240nm时的分离度相对较好，保留时间适中，山茱萸在此梯度下各个峰也能达到很好的分离效果。 2.2.3　主要成分峰的确定依据参照物马钱素和山萸肉中主要有效成分莫诺苷HPLC图谱和参考文献对照保留时间，确定出主要成分马钱素、莫诺苷的成分峰。参照物马钱素和莫诺苷HPLC图谱和山萸肉饮片指纹图谱见图1、图2。 2.3　指纹图谱的测定 2.3.1　精密度及稳定性试验精密吸取马钱素对照品溶液进样，以河南巩义生产的山茱萸饮片为供试品，按上述的提取方法提取供试液，1天内连续进样5次，记录各共有峰保留时间和峰面积。以马钱素的保留时间和峰面积积分值为参照，换算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积积分值。结果显示，山茱萸饮片的制备样品在1天内通过高效液相色谱分析其指纹图谱稳定，共有峰的(相对)保留时间和(相对)峰积分面积值一致，相对标准偏差小于3.0％。表明山萸肉饮片样品稳定性较好；仪器的整个检测系统的精密度良好。结果见表1、表2。 2.3.2　重现性试验取河南巩义供试品5份，按上述方法进行制备和测定，考察各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值的一致性。结果表明，所考察的共有峰的相对保留时间及相对峰面积具有较好的重