强脉冲光对培养人成纤维细胞表达MMP-1及TIMP-1影响.docVIP

强脉冲光对培养人成纤维细胞表达MMP-1及TIMP-1影响[摘要]目的：观察强脉冲光照射对体外培养的成纤维细胞表达基质金属蛋白酶(MMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的影响，探讨IPL嫩肤作用的分子生物学机制。方法：采用能量密度分别为20、25、30J/cm2的强脉冲光对培养的人成纤维细胞进行照射，于照射后24h及48h应用ELISA法测定上清液中MMP-1和TIMP-1的表达并与对照组比较。结果：照射24h后25及30J/cm2组上清液中检测到的MMP-1、TIMP-1含量轻度升高；48h时各能量组MMP-1均升高，但各组间并无显著性差异。TIMP-1随能量的升高而含量增高。结论：强脉冲光照射成纤维细胞后可引起MMP-1，TIMP-1表达的增加，但是TIMP-1的增加远远大于MMP-1的增加，提示IPL嫩肤作用的生物学机制可能与成纤维细胞产生的TIMP-1增加有关。 [关键词]强脉冲光；成纤维细胞；MMP-1；TIMP-1 [中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008－6455(2007)07－0885－03 细胞外基质(extracellular mattix，ECM)在维持正常组织与功能及细胞生长、分化过程中起着非常蓖要的作用，它处于不断新陈代谢、降解重塑的动态平衡中。基质金属蛋白酶(matrix metal－loproteiEases，MMP)是降解ECM的重要酶类，几乎能降解细胞外基质的所有成分。而组织金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of metallopro－teiEase，TIMP)是MMP的天然抑制物，是一组能抑制MMP活性的多功能因子。MMP和TIMP之间的平衡关系在调节ECM的稳定中有重要作用。 临床实践证明强脉冲光(IPL)可有效改善面部皮肤光老化，但生物学机制尚不完全清楚。据文献报道IPL通过光热解效应对组织产生一定程度热损伤而启动损伤修复机制达到组织重塑的目的，但在对组织修复机制的研究中，MMP-1和TIMP-1在其中作用的研究报道少见。据此，本实验观察IPL作用于培养的人成纤维细胞后，上清液中表达MMP-1和TIMP-l动态变化的影响，从蛋白水平研究IPL在治疗皮肤光老化过程中MMP-1和TIMP-l所起的作用，以探讨强脉冲光(IPL)治疗作用的生物学机制。 1 材料和方法 1．1　试验仪器：IPL Quantum SR光子嫩肤仪(Lume－nis公司)，台式高速离心机，恒温水浴箱，酶标仪(美国450型酶联检测仪)。 1．2　细胞准备及实验分组 1．2．1　成纤维细胞培养：取正常儿童包皮组织，应用组织块贴壁法原代培养，培养成功后传代培养，试验时用第三代至第五代细胞。 1．2．2　实验分组 1．2．2．1　实验分组：对照组为空白，实验组照射参数参照临床常用治疗参数，即波长选择为560－1200nm脉冲类型为双脉冲，脉宽为34ms(第一子脉冲3.0ms，延迟25ms，第二脉冲6.0ms)，分为三组，能量密度分别为20J/cm2，25j/cm2，30J/cm2。 1．2．2．2　样品准备：①每孔2×105个细胞接种于3.5cm培养板中，细胞生长至亚融合时给予IPL照射。将亚融合状态的培养细胞分为照光组(6个)和对照组(1个)，每次共7皿，实验独立重复4次。照射前细胞用磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)换液，使PBS刚好覆盖细胞，室内消毒1h，枪头用75％酒精擦拭，采用Quantum SR光子嫩肤仪，每个培养皿照射5次， 能量密度分别为20j/cm2，25J/cm2，30j/cm2，每组能量两个培养皿。照射后弃去覆盖液PBS，在成纤维细胞中加入DMEM培养基，并全部放回孵箱继续培养，对照组除未给予IPL照射外，其余与照光组处理相同。②24h及48h后分别收集培养液的上清液置Ep管中，放置于-20℃冰箱冷藏备用。 1．3　上清液中MMP-1和TIMP-1的检测：采用双抗体夹心ABC－ELISA法，在492nm处测OD值，MMP－1浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中MMP-1浓度。人TIMP-1酶联免疫测定步骤及结果判断同上。 1．4　统计学处理：数据采用x ±s表示，采用SPSS10.0统计软件对数据进行单因素方差分析，q检验及t检验，P＜0.05为有统计学差异。 2　结果 在体外培养的成纤维细胞分别用20J/cm2，25J/cm2，30J/cm2IPL照射，24h及48h后上清液检测MMP-1和TIMP-1表达。 2．1　IPL照射后体外培养的成纤维细胞上清液检测MMP-1：在培养24h后上清液检测MMP-1，与对照相比检测到的MM