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毛囊来源干细胞及其在组织工程皮肤中探究现状成体干细胞（adult stem cells）是一类存在于具有自我更新功能组织中的原始细胞，它具有高度增殖潜能和终生无限的自我更新能力，在细胞的生长和分化过程中起主导作用[1]。而毛囊的周期性生长提示毛囊结构中也存在着成体干细胞，称为毛囊干细胞。毛囊干细胞的应用途径有多种，组织工程皮肤便是其应用中充满前景的一条。组织工程皮肤的构建早已开始，开始是将角质形成细胞作为种子细胞[2]，其后又采用表皮干细胞为种子细胞构建了组织工程皮肤[3]，但构建的皮肤存在排异、供皮量有限、无法构建皮肤附属器等问题。由于毛囊干细胞具有多向分化的潜能，可构建包含皮肤附属器以及黑素细胞的皮肤，在临床应用前景更为广阔，已成为组织工程皮肤重点研究的种子细胞。 1毛囊的结构 毛囊是由表皮向下凹陷形成，由上至下分为漏斗部、峡部、茎部、球部四个部分，可发生周期性改变。由内至外分为上皮性毛根鞘和毛囊周围鞘两部分，两者之间有玻璃膜。上皮性毛根鞘起源于表皮，又分为外根鞘和内根鞘。外根鞘相当于表皮的基底层和棘细胞层，在峡部末端外毛根鞘细胞增殖，并且形成隆起，通常称其为隆突部。内根鞘由亨利层和赫胥黎层构成。 2毛囊来源干细胞 来源于毛囊中的成体干细胞称为毛囊来源干细胞。毛囊结构中包含有多种干细胞，如表皮干细胞、真皮干细胞、黑素干细胞等，它们各自的表明标志，组织定位，具体功能等都不尽相同。表皮干细胞(Epithelial stem cells)即我们研究最多的毛囊来源干细胞（后文简称毛囊干细胞），它的定位、表面标志及调控途径将在后文中作详细阐述。真皮干细胞(Dermal stem cells)毛囊真皮细胞最先被发现具有干细胞和组细胞特性是在对胡须的毛囊组织进行再生实验时发现的[4]。这类真皮干细胞主要存在于真皮乳头和真皮鞘中，在某种程度上来自这两处的细胞是可以互换的[5]。Reynolds等[6]从成人毛囊真皮中分离得到的细胞被发现具有诱导形成各种上皮细胞并进而形成毛囊结构的能力。还有研究人员通过标记的真皮细胞证实了皮肤中的真皮细胞在创伤后能够由毛囊的真皮细胞完全再生[7]。黑素细胞干细胞（Melanocyte stem cells），目前研究发现在毛发外毛根鞘中存在着处于某一分化阶段的黑素细胞干细胞[8]。也有实验证明了黑素干细胞的存在[9-10]。但目前为止，对于黑素干细胞还未发现特异的分子标记。近年有研究者发现Pax3和Mitf是控制黑素干细胞维持和分化的关键表面分子[11]。 3毛囊干细胞的定位 早期人们在毛球部发现该部分细胞分裂显著，故推测毛球是细胞分裂和毛囊生长期起始的重要部位，毛球部可能含有干细胞[12-13]。随着研究的深入，毛囊干细胞的众多特性被发现，慢周期性便是其中之一[1]。Cotsarelis等[14]使用3H-TdR对小鼠皮肤进行连续标记，4周后发现95％以上的毛囊隆突部细胞仍保持标记，从而提出了隆突激活假说（bulge activation hypothesis）。此后，Taylor等[3]采用Brdu和3H双标记滞留方法亦证实毛囊干细胞定位于上段的隆突区。Oshima等[15]利用转基因方法构建了表达β半乳糖苷酶的小鼠毛囊来证实毛囊干细胞定位于隆突部。虽然有大量的实验证实隆突部存在毛囊干细胞，但利用干细胞慢周期特性和毛囊生长周期特点对人毛囊进行体外分析发现，毛囊干细胞在胚胎期定位于隆突区，而在成人中，有部分毛囊干细胞还存在于毛囊下段隆突区以下的外根鞘中[16]，即毛囊中有两个干细胞库。故对毛囊干细胞的确切定位尚有争议。 4毛囊干细胞表面标志 毛囊干细胞的表面标志是分离、鉴定毛囊干细胞的重要依据。目前为止，毛囊干细胞尚缺乏具有高度特异性的表面标志，但近年来，利用各种标志和各种技术对毛囊干细胞进行分离取得了一些进展[17]，所发现的相对特异的表面标志有以下几个。 4.1 整合素：表皮干细胞表面常高表达某些介导干细胞与基底膜粘附的整合素，β1整合素便是现在认为毛囊干细胞存在的标志之一。对表皮基底层细胞的β1整合素进行标记后检测，发现表达β1整合素的细胞具有更高的克隆形成率[18]。近年还有研究发现表达α6整合素的细胞，通过与β4整合素的作用接和于基膜，这类细胞比表达β1整合素的细胞有更高的增殖潜能[19]。Kaur等[20]发现表皮基底层α6表达阳性、10G7表达阴性的细胞比β1表达阳性、10G7表达阴性的细胞具有更高的增殖潜能，预示整合素α6可能是比β1更好的分子标记。但尽管如此，β1整合素和α6整合素由于在某些不具有干细胞特性的细胞中也能高表达，仍不能认为是毛囊干细胞的特异性标志[21]。 4.2 CD34：CD34在鼠的毛囊隆突区的细胞中有表