解毒通络调肝散对胰岛素抵抗大鼠肝脏NFκB及MCP1表达的影响.docVIP

　　解毒通络调肝散对胰岛素抵抗大鼠肝脏NFκB及MCP1表达的影响 【关键词】 胰岛素抵抗(IR); 解毒通络调肝散;核因子(NF)κB;单核细胞趋化蛋白(MCP)1 　　【Abstract】 Objective To investigate the effect of JieDuTongLuoTiaoGanSan (JDTLTGS) on nuclear factor (NF)κB and monocyte chemoattractant protein (MCP)1 of liver in insulin resistant (IR) rats.Methods IR model rats induced by high fat and glucose food and STZ ly divided into model，metformin，pioglitazone，and JDTLTGS groups.After 8 aceutical mechanisms might be closely related odel group liver，and inhibiting the inflammatory pathogenesis in liver. 　　【Key oattractant protein (MCP)1 　　胰岛素抵抗(IR)是2型糖尿病(T2DM)的重要发病机制之一，但其具体的病理基础较为复杂，国内已有中医药防治IR的临床及试验报道。前期工作表明〔1〕，解毒通络调肝散能改善实验动物IR，为进一步探讨其改善IR的作用机制，本实验观察了解毒通络调肝散对实验性DM大鼠肝组织核因子κB(NFκB)、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)及MCP1 mRNA表达的影响，探讨肝组织NFκB与MCP1途径与T2DM、IR之间的关系。 　 　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 清洁级8周龄雄性模型组52只。正常对照组给予基础饲料，模型组给予高热量饲料。4 g/kg，于注射STZ 1 mol/L和120 min血糖gt;11.1 mmol/L为DM，具备上述一条为糖耐量减低(IGT)〔2〕。取DM或IGT模型组动物为实验对象。将造模成功大鼠48只按血糖峰值分层，随机分为模型组(n=12)，中药组(n=12)，二甲双胍组(n=12)，吡格列酮组(n=12)。3个 治疗 组分别每日定时灌服解毒通络调肝散悬混液5 g·kg-1·d-1、二甲双胍水溶液0.5 g·kg-1·d-1、吡格列酮悬混液5 mg·kg-1·d-1，动物自由进食饮水，正常对照组喂普通饲料，其他组喂高热量饲料。治疗周期为8 a公司;末端全血葡萄糖测试条：北京怡成生物 电子 技术有限公司。胰岛素放免试剂盒购自北京东亚生物技术有限公司。兔抗大鼠NFκB、MCP1多克隆抗体购自武汉博士德公司。 　　1.3 检测指标及方法 　　1.3.1 生化指标的检测 血糖：怡成血糖仪检测;血清胰岛素：磁酶免分析仪I(美国BioRad)检测;胰岛素敏感指数(ISI)：Ln(1/空腹血糖×空腹胰岛素)。 　　1.3.2 肝组织NFκB p65、MCP1蛋白表达测定 采用免疫组织化学SP法检测。一抗分别为兔抗大鼠NFκB p65(工作浓度1∶100)，MCP1多抗(工作浓度：1∶100);二抗均为山羊抗兔IgG，生物素标记来自抗兔的辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素SP试剂盒。严格按试剂盒说明书进行。 　　1.3.3 免疫组化染色半定量评分 所有切片均由有经验的病理科医师盲法阅片作出诊断，每张切片观察5个×400视野。结果评定标准：着色程度：不着色者为0分，着色淡者为1分，中等着色为2分，着色深者为3分。着色细胞阳性范围：无着色0分，着色阳性细胞小于1/3为1分，着色阳性细胞1/3～1/2为2分，着色阳性细胞大于1/2为3分。将每张切片着色程度与着色细胞阳性范围得分各自相加为其最后计分。 　　1.3.4 肝组织MCP1 mRNA表达测定 按Trizol试剂说明书。根据 文献 〔3〕合成MCP1寡核苷酸(PCR)引物。MCP1引物序列：上游 5′CACCTGCTGCTACTCATTCACT3′;下游 5′GTTCTCTGTCATACTGGTCACTTC3′。GAPDH引物序列：上游 5′ACCACAGTCCATGCCATCAC 3′;下游 5′ TCCACCACCCTGTTGCTGTA3′。引物由北京鼎国生物技术 发展 公司合成。扩增条件为：94℃预变性2 min后进入如下循环：94℃→45 s，55℃→45 s，72℃→45 s，循环数为30个，最后于72℃延伸10 min。扩增的MCP1长度为349 bp，GAPDH长度