鸡传染性法氏囊病病毒VP5基因的克隆及其序列分析.pdfVIP

( ) 第 36 卷 　第 3 期 山　东 　大 　学 　学 　报 自然科学版 200 1 年 9 月 　　　　　　 　　　　　 Vol . 36 　No . 3 J OU RN AL O F SHAN DON G U N IV ER SI T Y Sep t . 200 1 ( ) 　文章编号 200 1 鸡传染性法氏囊病病毒 V P5 基因的 克隆及其序列分析 1 1 2 刘存仁 ,于善清 ,Frederick C . L eung ( 1. 山东大学 生命科学学院 , 山东 济南 250 100 ;2 . 香港大学 动物学系 ,香港) 摘要 :从病变鸡法 氏囊组织中分离纯化 IBDV ,提取其基因组 RN A . 以 IBDV RN A 为模板 ,进行反转录反应合成 cDN A 第 1 链. 采用 PCR 技术扩增 V P5 基 因. 将 PCR 产物经酶切后与p cDN A 3 . 1 ( + ) 载体连接 ,经转化 、筛选得到重组质 粒p IBDVV P5 . 对 V P5 基因进行了测序并对其序列进行了分析. 关键词 :传染性法氏囊病病毒 ;V P5 基因;克隆;测序 中图分类号 :S858 . 3 1 　　　文献标识码 :A ( ) 鸡传染性法氏囊病病毒 inf ectiou s bur sal di sease viru s , IBDV 是导致鸡法氏囊病变 的病原体 ,给养禽业造成重大损失. IBDV 为一种双节段双链 RN A 病毒 ,含 A 、B 两个 RN A 片段 ,其大小分别约为 3 . 4kb 和 2 . 9kb . B 片段仅含 1 个阅读框 ,其编码产物为 IB ( ) DV 的 RN A 聚合酶. A 片段编码 4 种病毒蛋 白 viral p rot ein ,V P ,其中 V P2 、V P4 和 V P3 同为 1 个阅读框编码 , 以前体蛋白形式合成后酶解而成. V P2 和 V P3 是 IBDV 核衣 壳的主要结构成分 ,其中V P2 是 IBDV 的宿主保护性抗原. V P5 基因位于A 片段的近 5 ’ 端 ,其绝大部分编码序列与 V P2 基因的5 ’端序列重叠. [ 1 ]V P5 首先由Mun dt 等在 IBDV 感染的体外培养的细胞中发现. [2 ]但 目前有关 V P5 的生物学功能仍不清楚. 本文从感染 IBDV 的鸡法氏囊组织中分离病毒及其 RN A ,采用反转录和 PCR 技术克隆了 V P5 基因 并对其序列进行了分析 ,为研究 V P5 的体外表达及其功能奠定了基础. 1 　材料和方法 1 . 1 　病毒 、菌株和质粒 超强毒 IBDV H K46 为香港大学动物系 L eung 博士实验室保存的样品 ,从香港地区 收稿 日期 ( ) 基金项 目: 国家教育部留学回国人员基金资助 2000479 . ( ) 作者简介 :刘存仁 196 1 - ,男 ,副教授 ,博士 ,主要从事细胞分化和病毒分子生物学方面的研究工作. 第 3 期 　　　　刘存仁等 :鸡传染性法氏囊病病毒