呼吸道标本的细菌培养11.10.pptVIP

儿童呼吸道常见细菌培养鉴定技术 广州市妇女儿童医疗中心检验科 邓秋连 病原菌确定原则 自从发现细菌以来，已经确定上百种疾病的病原菌，对这些常见的传染病，通常只要检出已经确定的病原菌，就可以认定这种疾病的原因。 新出现的传染病，需要用确定病原菌的古老标准来确定。 对病人组织、器官中分离到的一种微生物，不足以说明就是疾病的原因。对于细菌性疾病，需要满足郭霍原则（Koch）。 郭霍原则的四个条件 从一种疾病病人中能有规律地发现一种细菌； 能够分离这种细菌获得纯培养； 把这种细菌的培养物引入易感动物体内，可以引起与病人类似的疾病； 在实验感染引起的疾病中，仍然能够分了同一种细菌。 只有能够满足所有四个条件，才能确定该种细菌室相应疾病的病原。 提 纲 （一）呼吸道标本的采集。 痰标本是反映下呼吸道感染最直接的标志物，痰标本采集过程污染机会多，痰标本采集方便、无痛苦。 （二）合格的痰标本。 （三）呼吸道（痰）标本细菌培养存在的问题。 （四）呼吸道（痰）标本接种处理。 （五）呼吸道（痰）标本细菌报告。 （六）肺炎链球菌的分离培养技术。 （七）流感嗜血杆菌的分离培养技术。 （一）痰标本采集方法： 1)自然咳痰：要求患者留痰前用清水漱口3次, 用力咳出。首先用灭菌生理盐水将痰液洗3次，然后将痰块打碎，制成悬液后再接种。 2) 采用吸痰器吸痰：吸痰前可以超声雾化、轻拍背部促进患儿排痰。用于新生儿 （一）痰标本采集方法： 3) 纤维支气管镜抽取法：适用于纤维支气管镜检查或治疗的患者。在肺内病灶附近直接取得的标本无疑是比较理想的标本，但对患者有一定的痛苦。 4）压舌取痰法：对于多数小儿可采用此方法。以压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，经压舌刺激咳痰时，喷出的肺部或气管分泌物会黏附在拭子上。 （二）合格的痰标本。 痰标本留取后应先涂片, 进行革兰染色镜检合格后再接种。 镜检不合格标本, 应通知临床重新留取标本。 痰标本合格的标准： 痰标本 鳞状上皮细 白血球 细菌种类 合格 =10/低倍 =10 1-3种 不合格 =25/低倍 =10 3种 （三）痰标本细菌培养存在的问题。 痰标本不合格：痰标本已被唾液、食物、口腔细菌污染。 标本接种不及时：新入院病人用药前采集标本后未及时送检，到下午采集中送检。呼吸道常见细菌如流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌等苛养菌是很娇的细菌，如不及时送检这些细菌均会死亡，尤其脑膜炎奈瑟菌需保温送检。标本应在采集后1小时内接种培养。 （三）痰标本细菌培养存在的问题。 培养基不合格： 肺炎链球菌、化脓性链球菌可以在绵羊血平板上生长，绵羊血不含X因子，所以流感嗜血杆菌、奈瑟菌在绵羊血巧克力平板上生长差或不生长，要加入一种含X因子的添加剂才能生长良好，而马血、兔血同时含有V和X因子，所以采用马血或兔血制的巧克力平板，流感嗜血杆菌、奈瑟菌生长良好。 痰标本的培养时间： 呼吸道(痰)标本培养应该为24~72小时。24小时培养后细菌生长稀少或未生长的平板应继续培养到72小时后再作报告，防止一些生长缓慢的细菌会遗漏，如卡他莫拉菌、奴卡菌、嗜血杆菌等。 （四）呼吸道（痰）标本的接种处理 涂片革兰氏染色，观察痰标本是否合格。 血琼脂：哥伦比亚琼脂或胰大豆胨琼脂、5％绵羊血、或加适量抑制剂如庆大霉素有利于肺炎链球菌生长。 巧克力琼脂：哥伦比亚琼脂+5％马血或兔血+3mg/100mL去甲万古霉素或杆菌肽，有利于嗜血杆菌的分离培养。 (五)痰标本致病菌的选择和报告 占一定优势并已明确的致病菌：金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、β-溶血性链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、隐球菌等。 对溶血葡萄球菌、其他嗜血杆菌如占70%或以上量时，也应报告给临床医生参考。 优势菌：阴性杆菌占50%量或以上时，应报告。 (五)痰标本致病菌的选择和报告 草绿色链球菌、奈瑟菌、类白喉、凝固酶阴性葡萄球菌、副流感嗜血杆菌等无充分理由，不应作为致病菌报告。 除呼吸道正常菌群外多于3种或以上细菌时，要考虑痰标本的口腔污染。 卡它莫拉菌识别： * 可在血琼脂或巧克力上生长 * 灰略黄、干燥但可在盐水中乳化，可用接种环推动整个菌落。 （六）肺炎链球菌培养技术 前 言 肺炎链球菌(Streptococcus pneumoconia，SP)是儿童和成人肺炎的重要病原菌之一，存在于正常人口腔、鼻咽部，在机体抵抗力下降时致病。在儿童中可引起肺炎、中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、细菌性脑膜炎、败血症等疾病，尤其对婴幼儿构成严重威胁。 国外概况 在美国，每年侵袭性SP感染