甘康冲剂对小鼠免疫性肝损伤保护作用.doc

甘康冲剂对小鼠免疫性肝损伤保护作用[摘要]目的研究甘康对小鼠免疫性肝损伤的保护作用及可能机制。方法用BCG+LPS建立免疫性肝损伤小鼠模型,用分光光度法检测血清中ALT、AST水平和肝匀浆GSH-px、SOD含量。结果甘康(200、400和800 mgkg-1×10d)灌胃给药均能降低血清中升高的转氨酶水平,减轻肝组织坏死范围和程度,减少炎细胞浸润,使升高的肝指数降低,甘康还可降低肝匀浆MDA含量,使降低的肝匀浆GSH-px、SOD活性升高。结论甘康冲剂对药物致免疫性肝损伤具有保护作用,其机制与其抗自由基等有关。 [关键词] 甘康; 免疫性肝损伤; 机制 [中图分类号]R965[文献标识码]A [文章编号] 1005-0515(2010)-8-166-02 甘康冲剂系临床验方,由柴胡20 g、丹参20 g、甘草6 g、广郁金20 g、赤芍10 g、茯苓10 g组成,益气活血,养血柔肝。为方便患者取用,我们采用江苏江阴药业有限公司生产的中药单味饮片浓缩干粉直接混合、冲服,该产品的生产工艺及质量标准均符合国家药监局的要求。因浓缩干粉用量小于中药饮片,按厂家规定的与中药饮片换算标准,该冲剂的用量为柴胡3 g、丹参3 g、甘草1 g、广郁金1 g、赤芍1 g、茯苓1 g。为从基础实验上探讨该冲剂的相关功效及作用机制,为进一步的开发提供实验支持,我所采用了卡介苗(Bacillus Calmette Guerin, BCG)和脂多糖(lipopo-lysaccharide, LPS)诱导的免疫性肝损伤模型,观察了甘康对该模型的保护作用,初步探讨其可能的作用机制。 1材料 1.1药物甘康冲剂(由柴胡、丹参、甘草、广郁金、赤芍、茯苓组成,其成分比例为:3:3:1:1:1:1),由蚌埠医学院第二附属医院提供,临用前用双蒸馏水溶解。葵花护肝片:由黑龙江葵花药业股份有限公司生产,批号临用前用双蒸馏水溶解至所需浓度。生理盐水,由上海华源长富药业(集团)有限公司生产,批号 1.2 试剂BCG系卫生部上海生物制品研究所产品,LPS系美国Sigma 公司产品,临用前用生理盐水稀释,批号丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)测定试剂盒,批号天冬门氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)测定试剂盒,批号丙二醛(malondiadehyde MDA)测定试剂盒,批号超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)测定试剂盒,批号谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-px)测定试剂盒,批号均为南京建成生物工程研究所产品。 1.3动物昆明种小鼠,♂,体重20～24g,普通级,安徽医科大学实验动物中心。在恒温(22～28℃)、光照正常环境中饲养一周后实验,实验前24h禁食,任意饮水。 1.4仪器与设备TDZ4-WS台式低速离心机,长沙湘仪离心机仪器有限公司产品;756可见紫外分光光度计,上海分析仪器厂产品;DIA X-900型内切式组织匀浆机,德国Heidolph公司产品;电热恒温水浴锅:上海医疗器械五厂产品。 2方法 2.1 BCG/LPS致小鼠免疫性肝损伤模型的建立造模第1天给昆明种雄性小鼠经尾iv BCG 2.5mg/0.2ml/只(0.2ml/只约含5.0×107个活菌数),10d后每次尾iv LPS 7.5μg,0.2ml/只。禁食16h后处死动物,自小鼠后眼睛静脉丛采血,测定血清转氨酶活性;取肝脏、脾脏称重,计算肝脏指数和脾脏指数,另取小块肝脏组织,用冷生理盐水洗去浮血,拭干,称取0.5g肝组织,用冷生理盐水制成10%的肝匀浆待用。 2.2动物分组及处理设正常对照组、模型组、甘康给药组(200、400、800 mgkg-1 3个剂量)和阳性对照组即葵花护肝片(1000 mgkg-1)。将动物按体重随机分组,每组10只。用药方案:自造模前1周起,按20 mlkg-1体积分别给予不同剂量药物,ig给药,每天1次,末次给药在iv LPS激发肝损伤前,共10次;正常对照组和模型组给予等量溶媒。 2.3 观察指标ALT,AST,MDA,SOD和GSH的测定采用分光光度计法测定,严格按试剂盒说明书的操作步骤进行操作;肝脏病理组织学观察:处理小鼠后,取小块肝脏用10%甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色,光镜下观察肝脏的组织学变化。 2.4 统计学处理实验结果均以(X±S)表示,采用统计软件SPSS 10.0中的