疾病控制中心PCR实验室管理要素.docVIP

疾病控制中心PCR实验室管理要素摘 要 聚合酶链反应(PCR)技术已广泛应用于临床诊断、公共卫生监测和动植物检验检疫等领域，因此建立PCR实验室，必须要按照相关的法规进行严格科学的管理。本文对疾病控制中心的PCR实验室的基因扩增检验实验室区域的设置、人员的管理和培训、污染及处理污染的措施、质量管理体系的建立及质量控制、样本的采集与处理、仪器设备的校准及保养维护、实验室安全等几方面的管理要素进行了分析，其目的是为临床检测和诊断提供更加科学和准确的报告。 关键词 聚合酶链反应 实验室 质量管理 doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2009.11.222 基因扩增检验实验室区域的设置 荧光PCR实验室设置是一个很规范的要求，应遵守相关法规进行实验室的设置。总的方针是各区独立，注意风向，因地制宜，方便工作。实验室装修应方便清洁，不应出现死角。荧光PCR实验室应分为：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。如使用全自动分析仪，区域可适当合并。各工作区域必须要有明确的标记，进入各工作区域严格按照单一方向进行，只能从试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区这样一个行程进行。最好做到专区专人，区内物品专用。各区应具备的设备配置：屋顶紫外灯、近台紫外灯、一次性手套、一次性鞋套、工作服、废液缸、扫帚、拖把、废纸篓、微量加样器覆盖1～1000L、经高压处理过的离心管和加样器吸头、笔、纸等，注意避免不同工作区域内的设备、物品混用。 人员的管理和培训 从事PCR实验室工作人员，应具备医学检验和微生物检验的基本知识，且是受过临床基因扩增实验室基础知识和技能的培训并获得上岗证书的人员。中心主任要亲自负责实验室全面管理、技术指导、解决与沟通技术疑难等问题。同时为了加强专业知识和技能的训练，中心要不定期外请专业人员进行培训和派送相关人员外出学习，做好后备人员的培养。要求PCR实验室人员定期写学术综述或经验总结，能够顺利地通过国家设立的定期考核。对PCR的原理、应用范围、局限性及发生污染的每一个环节要有充分的了解，熟悉操作规程，善于分析试验结果。要建立技术人员档案，做好对本室人员的管理。 污染及处理污染的措施 荧光PCR的污染分为实验前的污染和实验进行中的污染。实验前的污染是指实验材料的污染，主要是病人标本来源的核酸；而实验进行中的污染，通常实验过程中的每一步骤都可能发生对样本的污染。核酸的制备是较常产生污染的过程，荧光PCR反应进行过程中所涉及到的实验设备的任何部位，也是可能的污染源。而PCR产物是个高度危险的污染源，通常的阳性PCR产物含有大量的目标模板分子，极易泄露产生气溶胶污染整个实验室。在日常工作中需要加强对污染的监测，每次PCR实验务必做各种阴阳性对照。①阳性对照：阳性对照要选择扩增度中等、重复性好的模板进行，监测PCR反应是否成功且是否合乎理论要求。②标本对照：被检测的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照。③试剂对照：在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂及环境是否污染。有时轻微的气溶胶污染还需要复管试验、重复性试验等。所以实验室所有人员应充分认识预防污染的重要性，了解产生污染的原因，如：①标本间交叉污染。在核酸提取过程中一定要小心操作，防止飞溅，做好标记，避免样本间的交叉污染。配好反应液并加入待测核酸后，必须盖好反应管，要有明确的样品处理程序。②PCR试剂的污染。主要是由于在PCR试剂的配置过程中加样枪、容器、双蒸水及其他溶液被PCR核酸模板污染。③PCR扩增产物污染。主要是气溶胶污染，一定要选用质量好的离心管和反应管，避免试剂飞溅、外泄。同时必须要有高度的责任感，反应完毕后应及时把反应物清理掉，避免荧光PCR后的产物反应管在工作区内打开。 要避免污染，首先应是预防而不是排除污染。实验室工作区的严格划分的目的就是为了预防污染，工作区之间传递窗的设置，一方面方便了试剂、样品等在不同实验室区间的传递；另一方面也增加了交叉污染的危险，因此要定期对传递窗进行处理或用移动紫外灯照射。工作结束后必须立即对工作区进行清洁，用10%次氯酸钠擦拭，再用70%乙醇擦拭，然后再用可移动紫外灯调至实验台上60～90cm内过夜照射，可有效打断扩增产物。一旦污染发生，应立即进行清洁卫生、稀盐酸液擦拭或浸泡、通风疏散、紫外灯照射、酸雾处理等措施，尽快消除污染。也可选用不同区域的引物进行PCR扩增，尽快恢复正常工作状态。造成荧光PCR污染的原因很多也较复杂的，因此必须对荧光PCR实验室进行严格的科学管理。 质量管理体系的建立及质量控制 实验室质量管理体系包括三部分：即质量方针与宗旨、工作制度、标准操作