硫酸化茯苓多糖探究进展.docVIP

硫酸化茯苓多糖探究进展茯苓(Poria cocos)是我国传统的名贵中药材,主产云南(云苓)、安徽(安苓)、贵州、广西、湖北、福建(闽苓)等地,为多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核,属担子菌纲真菌,具有渗湿、健脾、利尿等功能。茯苓多糖为我国传统中药茯苓的主要有效成分,可用于医疗、保健等领域,具有广阔的开发应用前景。为进一步优化茯苓多糖的提取工艺,促进其开发应用,文章参考大量国内外文献,对近几年茯苓多糖的提取、纯化及其应用作一综述。 1茯苓多糖的化学组分 众多文献报导β-D-(1-3,1-6)葡聚糖有显著的调理或增强人体免疫功能,但由于高分子量和复杂的高级分子结构,一些多糖的水溶性很差,只有对这些多糖进行结构修饰和改造才可以更好地利用它们。Chihara等[1]通过Smith降解除去β-1,6分支,将β-茯苓聚糖转化成β-茯苓多糖(Pachymaran),对实体瘤S180的抑瘤率从0提高到88％。Hamuro等[2]采用液固相振荡半合成工艺,制取了羧甲基茯苓多糖(Carboxymethylpachymaran,CMP),水溶性得到很大改善,动物试验的结果表明,CMP抗肿瘤作用较强。将天然多糖进行硫酸酯化修饰也是多糖结构改造的一个研究热点,多糖硫酸化后可以增强原有的生物活性或产生新的功能。 2茯苓多糖的提取及纯化 茯苓多糖主要存在于茯苓细胞壁中,按照溶解度的不同又分为水溶性茯苓多糖和碱溶性茯苓多糖。通常采用水提醇沉法、碱提醇沉法提取。 2.1 水提醇沉法 称取20g茯苓粉末→10～20倍热水(95℃)浸提→抽滤→滤液减压浓缩(浸提液∶浓缩液=10∶1)→4倍体积的95%乙醇沉淀(含醇量达80%)→于冰箱中静置过夜→离心→沉淀物用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤→真空干燥得茯苓多糖粗品。该法采用水作为溶剂,具有价廉、无毒、操作安全等优点,其缺点是浸提时间长且提取率较低。 2.2 稀碱浸提法 稀碱法浸提碱溶性茯苓多糖应注意,在提取结束后应迅速用醋酸中和,以免多糖活性受影响。称取20g茯苓粉,分3次溶于总共为10倍体积的0.5MNaOH中,每次4℃浸提多糖8h,合并3次浸提上清液,10％醋酸中和至pH6～7,4℃冰箱中沉淀过夜。低温离心收集沉淀,去离子水洗涤沉淀3次,无水乙醇、丙酮和乙醚依次洗涤,70℃干燥得白色茯苓多糖,研成粉末待用。 该法提取率较水提醇沉法高,但浸提程序较繁琐,浸提条件较剧烈,极易破坏多糖的立体结构,使其生物活性受到限制。 2.3 茯苓多糖的纯化 将DEAE-650C层析柱水平衡后,取200mg精制多糖样品溶解于蒸馏水中上样, 蒸馏水洗脱60mL后,以0～3mol·L-1NaCl溶液梯度洗脱,流速1·0mL·min-1,每管收集2mL,分布收集、备用。然后用硫酸-苯酚法检测多糖含量,具体操作如下。 硫酸-苯酚显色液的配制:用50mL浓硫酸和10mL水配制实验用硫酸溶液,并加入0.6g苯酚,配制成显色液。 显色方法:移取1.00mL待测样品于试管中,加入5.00mL显色液,振荡混匀。置于沸水浴中保温30min,立即置于冷水浴中, 冷却至室温。以未加葡萄糖溶液作为空白对照。于490nm处测定系列葡萄糖溶液的吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标、吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。测定样品溶液490nm 处吸光度,据标准曲线计算多糖含量。 3硫酸化多糖的生物活性研究 硫酸化多糖具有独特的生物活性,主要表现在抗病毒、抗凝血、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化等方面。 3.1 硫酸化多糖的抗病毒活性 抗病毒活性是硫酸化多糖最显著的活性,许多经硫酸酯化的多糖,如香菇多糖、地衣多糖、右旋糖杆、裂褶菌多糖、木聚糖、箬叶多糖的硫酸酯有明显的抑制HIV-1(Human Immune Efficiency Virus Type1)活性,其作用机理是干扰HIV-1对宿主细胞的粘附作用,抑制逆转录酶的活性等。抗病毒硫酸酯化多糖的硫酸根取代度在1.5～2.0为最佳,如果将这些多糖的硫酸根除去,则上述活性随之消失。 Nakashima等人从海洋红藻Schizymenia pacifica分离到一种分子量大约为2×106Da的硫酸化多糖,含73%的半乳糖,20%的硫酸基,红外光谱和水解产物的分析表明这是一种γ-角叉菜胶。体外实验表明,该复合物能显著抑制逆转录酶的活性,在2×103 抑制单位/mL的浓度下可抑制92%的反转录酶活性。该抑制活性是特异性的,对正常细胞的生长没有影响。 3.2 硫酸化多糖的抗凝血和抗血栓活性 肝素和低分子肝素是硫酸化多糖抗凝血活性的代表,目前已经广泛应用于临床实践。低分子肝素是商品肝素降解的衍生物,平均分子量为4～8kD,糖基数13～22个。