绞股蓝总苷对免疫功能低下小鼠模型特异性免疫功能影响.docVIP

绞股蓝总苷对免疫功能低下小鼠模型特异性免疫功能影响摘要：目的：用鲮股蓝总苷作为免疫增强剂治疗免疫低下小鼠模型。观察特异性免疫功能的变化。探讨绞股蓝总苷免疫增强的药理作用，观察剂量效果关系。方法：小鼠随机分为6组，模型组皮下注射环磷酰胺，制造免疫低下模型，与各对照组和药物高、中、低剂量组分别作血清溶血素实验和小鼠迟发型变态反应，观察各组特异性免疫功能变化。结果：模型小鼠的体液免疫功能和细胞免疫功能明显下降，而阳性药和高、中剂量绞股蓝均可明显地增强该免疫功能，绞股蓝总苷的作用强度呈剂量依赖性，高剂量组的作用略强于阳性药。结论：以较低剂量环磷酰胺成功造成小鼠免疫低下模型。绞股蓝总苷能非常明显地增强特异性免疫功能，作用呈剂量依赖性。最高剂量推荐200－400=g／kg。 关键词：鲮股蓝总苷；溶血素；迟发型变态反应；NIH小鼠 中图分类号：P285.5 文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)01－0145－02 绞股蓝总皂苷(gypencides，GPs)是从葫芦科植物绞股蓝中提取的具有四环三萜达玛烷型结构的皂苷，到目前为止已分离出80多种皂苷成分，其中4种成分与人参皂苷Rbl、Rb3、Rd和F2在化学结构上完全相同。另外，尚有多种神经酸或酶水解后可能转化为人参皂苷Rg3、Rd和F2。据报道GPs有降血脂、抗衰老、调节机体免疫功能以及抗肿瘤等多种药理作用。本研究观察绞股蓝总甙片对免疫低下小鼠模型的特异性免疫功能的影响。 1　材料 1.1　药物绞股蓝总皂甙片(药物批号200401108)。陕西安康正大制药厂生产，皂苷含量97％，用生理盐水稀释成50mg／L浓度药液，给药剂量为：高剂量400rag／kg，中剂量200mg／lcg和低剂量50me／ks。甘露多聚糖肽片5rag／片(市购)，环磷酰胺粉针剂(本院药房领取)。 1.2　动物NIH小鼠，18－25g雄雌各半，广东省医学动物实验中心提供。豚鼠，雄雌不限，暨南大学实验动物中心提供。 1.3　试剂和器材阿氏液：葡萄糖2.05g，氯化钠0.42g，枸橼酸钠0.8g，蒸馏水加至1000mL，8磅10rain灭菌。都氏试剂：碳酸氢钠1.0g，高铁氰化钾0.2g，氰化钾0.05g，蒸馏水加至1000mL。补体：在3只豚鼠的新鲜血清中加入1／10压积SRBC，于4℃震荡30rain，2000r／rain离心10min。取上清液－20℃保存。鸡红细胞(CRBC)：无菌条件下割颈动脉取鸡血，置于有玻璃珠的三角烧瓶中轻摇10min去除纤维蛋白，加入2倍量阿氏液，置于4℃保存。临用前用生理盐水洗涤3次，2000r／rain离心10min得压积CRBC再按所需浓度稀释。(以上为体液免疫功能实验使用) 1％DNCB溶液：每次致敏或攻击前新鲜配制1％DNCB丙酮麻油溶液(丙酮：麻油为1：1)5mL，倒入小瓶内。盖好并用胶布封口，摇匀后。用250mL注射器通过瓶盖取用(细胞免疫功能实验使用)。 2　实验步骤 2.1　特异性体液免疫功能小鼠随机分组分成6组：正常对照组，模型组，阳性药物对照组，绞股蓝总苷高剂量组(400mg／kg)、中剂量组(200mg／kg)、低剂量组(50mg／kg)，每组10只。除前两组外，每组每日分别灌胃给药喂服绞股蓝总苷溶液一次，连续ll天。后5组动物均于第4天皮下注射环磷酰胺80mg／kg，制造免疫低下模型；并给所有小鼠静推5％CRBC生理盐水悬液0.2mL，按文献于第12天摘取眼球取血，分离血清，将血清用生理盐水稀释100倍。试管置冰浴中，依次加入稀释的血清lmL，5％CRBC0.5mL，10％补体ImL，37度恒温水浴保温31rain，移至冰浴中终止反应。另设不加CRBC生理盐水的空白对照(调零)组。1500r／rain离心5min，取上清lmL加蒸馏水3mL，摇匀放置10min，540hm下比色读取吸光度。另取5％CRBC 0.25加入蒸馏水至4mL，比色读取吸光度，作为CRBC半数溶血吸光度值。计算公式：HCS0＝OD／CRBC半数溶血OD×稀释倍数。 2.2　特异性细胞免疫功能小鼠随机分组分成6组：正常对照组，模型组，阳性药物(多抗甲素5mL)对照组，绞股蓝总苷高剂量组(400mg／kg)，中剂量组(200mg／kg)，低剂量组(50rag／lcg)，每组10只。除前两组外，每组每日分别灌胃给药喂服绞股蓝总苷溶液一次，连续9天。后5组动物均于第5天皮下注射环磷酰胺80mg／kg制造免疫低下模型，同时给所有小鼠腹部去毛。范围有3cm*3cm大小，并将DNCB溶液50ul均匀涂抹于上致敏，于次日再强化1次。致敏后第4天，将1％DNCB溶液10ul工均匀涂于小鼠右耳(两面)进行攻击，攻击后24h，