葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖影响.docVIP

葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖影响摘要 目的：探讨葛根素对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分空白对照组和葛根素组。葛根素组采用MTT法，观察12h、24h、48h和72h后GMcs的增殖水平。结果：随着葛根素浓度的提高及作用时间的延长，GMCs细胞的生长抑制率呈现上升趋势。结论：葛根素能抑制GMCs增殖，并与药物的浓度和作用时间呈明显正相关。 关键词 葛根素 大鼠 肾小球系膜细胞 增殖 肾小球系膜细胞增殖和系膜基质蓄积是大多数肾小球疾病发生、发展的共同病理表现，最终可导致肾小球硬化和肾间质纤维化［1］。临床上用于治疗肾脏疾病的许多药物都有抑制GMCs的增殖作用。 葛根素（Pue）是从豆科葛属植物野葛的干燥根中提取并分离出来的一种单体，具有扩张血管、降血脂、降血压、改善微循环、抗氧化等药理作用。本研究通过体外细胞培养，观察葛根素对大鼠肾小球系膜细胞GMCs增殖的影响，为临床应用提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 材料：大鼠肾小球系膜细胞GMCs由武汉大学提供，胎牛血清及MEM培养液购自GIBCO公司。 1.2 细胞培养：大鼠肾小球系膜细胞株用含体积分数为10%胎牛血清的MEM培养基，于37℃，5%CO2饱和湿度条件下培养，2～3天传代1次。 1.3 实验分组：实验分空白对照组和用药组(Pue组)，Pue组的Pue终浓度分别为0.5mg／ml、1mg／ml、1.5mg／ml、2mg／ml、2.5mg／ml、3mg／ml和3.5mg／ml，每个浓度重复3孔。 1.4 MTT法测定GMCs的增殖水平：取对数生长期细胞使其脱壁，用10％胎牛血清MEN培养液重悬成单细胞悬液。以1×103／孔密度将GMCs细胞接种于96孔细胞培养板，用含10％胎牛血清的MEM培养液培养24h后，弃去原有细胞培养液，加入用培养液稀释的葛根素各200ul，对照组只加含10％胎牛血清的MEM培养液，在培养12h、24h、48h和72h后,每孔加入5mg／mlMTT溶液20ul，继续培养4h后终止培养，小心吸弃孔内上清液，每孔加入DMSO150ul，震荡混合仪震荡10min，使结晶充分溶解，选择490nm波长酶标分析仪测定每孔光吸收值(OD值)。 2 结果 将GMCs细胞与不同浓度葛根素共培养后，用MTT法测定OD值，结果见表1。 3 讨论 肾小球系膜细胞GMCs常作为体外研究肾脏病变发生机制和药物疗效的细胞模型，系膜细胞增殖及炎症介质的释放在肾脏疾病的发生、发展及肾小球硬化中具有重要作用［2］。临床上许多用于治疗肾脏疾病的药物都有抑制GMCs增殖的作用。葛根素是豆科植物野葛干燥根的提取物。在本实验中，葛根素能抑制GMCs的增殖，0.5mg/ml浓度葛根素与GMCs细胞共培养12h后，检测的GMCs增殖水平与对照组之间无显著性差异，但随着葛根素浓度的增加或是共培养时间增加，与对照组之间都存在显著性差异。表明葛根素呈浓度依赖性地抑制肾小球系膜细胞的增殖，提示葛根素可以通过抑制GMCs的增殖来保护肾脏，从而延缓纤维化肾病及肾小球硬化的发生、发展。 4 参考文献 ［1］万建新，尤丹瑜，许昌声.氟伐他汀对转化生长因子β1诱导的系膜细胞结缔组织生长因子和Ⅳ型胶原表达的影响［J］.中国药理学通报，2007，23（11）：1501-1505. ［2］Marx J.How the glucocorticoids suppress immunity.Science［J］.1995,270(12)：232-241. 收稿日期 2008-11-21 1