补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠内皮细胞功能影响.docVIP

补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠内皮细胞功能影响摘要：目的：观察补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠血管内皮细胞功能的影响。方法：采用补肾活血中药药液灌服实验性血瘀证大鼠模型，将动物随机分为对照组、模型组、大剂量和小剂量共4组，每组10只。造模成功后。给药组灌服药物40天，然后下腔静脉取血，测定各观察指标和主动脉血管壁组织学变化。结果：补肾活血中药组血脂、血流变、内皮功能、凝血纤溶各项指标及组织形态学均有明显变化，接近正常组，与模型组有显著差异。结论：补肾活血中药有降低血液黏度、调节血脂和改善血管内皮细胞功能的作用。 关键词：血瘀证大鼠；补肾活血中药；血管内皮细胞功能 中图分类号：R285.5　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2007)09－1920－03 随着社会发展，人口老龄化趋势加快，防治老年病已成为医学界的重要研究领域。本实验是对实验性血瘀证大鼠内皮细胞功能进行研究，验证补肾活血中药对老年病的防治作用，为临床防治老年性疾病提供有价值的治疗方法。 1　材料与方法 1．1 实验动物 采用Wistar大鼠，雄性，12个月龄，48只，体重250－300g，由山东省医学科学院实验动物研究所提供，一级动物。动物观察室为清洁级。 1．2　实验试剂 胆固醇、甘油三酯、载脂蛋白试剂盒，上海长征一康仁医学科学有限公司提供；高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，北京中生生物工程高技术公司提供；内皮素、6－酮－前列腺素F1α。补血栓素B2放免药盒、NO试剂盒，解放军总医院科技开发中心放免所提供；t－PA试剂盒，上海医科大学分子遗传学研究室提供。 1．3　中药制剂 补肾活血液主要药物为：熟地、枸杞、仙灵脾、菟丝子、当归、丹参、桃仁、郁金、毛冬青。将药物放入多功能提取罐中，用65％乙醇热回流提取2次，第1次加8倍量65％乙醇，提取3h，放出药液；第2次加6倍量65％乙醇，提取2h，放净药液。两次药液一并滤出，70－75℃回收乙醇，回收后再减压浓缩(700C，0.06mPa)至0.8g／mL，真空包装备用。 1．4　动物高脂餐的制备 取猪油300g，加热融化，徐徐加入250g胆固醇，不断搅拌，待溶解后，慢慢加入50g胆盐和20g丙硫氧嘧啶(用前研术)，充分搅匀，再加入190mL吐温80和190mL丙二醇，不断搅拌至完全溶解，冷却，如不足1000mL，加蒸馏水补足。冰箱保存，用时加热化开。 1．5　实验分组及给药方法 将实验Wistar大鼠在实验环境下给予基础饲料常规饲养1周。随机分4组，各组比例为1:1，均为10只，各组均加20％脱落率，共48只。A－空白对照组(基础饲料+5mL／kg蒸馏水灌胃)，其余大鼠高脂餐饲养2周后再随机分3组，B－模型对照组(高脂饲料+5mL／kg蒸馏水灌胃)，C－中药大剂量组(高脂饲料+实验药物40mL／kg灌胃)、D－中药小剂量组(高脂饲料+实验药物20mIMkg灌胃)，给药加天后，各组动物均在腹腔麻醉后下腔静脉取血，备实验室化验测定各观察指标，然后处死，取各组实验动物的主动脉血管进行组织病理学检测。 1．6　标本检测 1．6．1　一般状态　每日观察动物外观变化，包括皮毛色泽、疏密、粪便形态、精神状态、实验前后体重变化变化等。 1．6．2　实验室　检查测定血液流变学、血小板聚集性和黏附性；测定血脂、血浆内皮功能(TXB2，6－keto－PGF1α，NO，ET－1)和PAI－1、t－PA等各项指标。 1．6．3　病理形态学观察　取主动脉血管壁组织进行检测，观察普通光镜血管内膜及电镜下内皮细胞的变化。 1．7　统计学处理 用Excel软件进行t检验，以x±s表示结果。 2　结　果 2．1　一般状况 实验结束时，治疗组与对照组比较无显著性差异，模型组精神萎靡、懒动、毛发稀松、大便溏稀、舌质紫黯。 2．2　指标测定 对实验大鼠血液流变学、血小板聚集性和黏附性、血脂、血浆内皮功能(TXB2，6－keto－PGFIα，NO，ET－1)和PAI－1、t－PA等各项指标的测定。 2．3　组织形态学检测 2．3．1　光镜下检测　取正常组、模型组、大剂量组和小剂量组大鼠各8只，在完成其他实验后处死，将主动脉取出10mm，放入中性福尔马林液中24h，做石蜡包埋，以主动脉血管横切面做常规切片，苏木素－伊红染色。在光镜下观察动脉血管内皮细胞损伤程度、血管壁增厚情况、泡沫细胞沉积及内弹力膜中断情况，将其分为轻(+)、中(++)、重(+++)3级。 2．3．2　透射电镜下检测 实验动物模型组细胞核凹陷不平，常染色质边聚，成团块状，核固缩，细胞器减少，胞浆溶解，线粒体呈空