高效液相色谱法测定尿毒康合剂中黄芪甲苷含量.docVIP

高效液相色谱法测定尿毒康合剂中黄芪甲苷含量摘要：目的：建立尿毒康合剂中黄芪甲苷的含量测定方法。方法：用高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量。结果：黄芪甲苷的平均回收率为97.6％，相对标准偏差RSD=0.55％。结论：本方法准确可靠，灵敏度高。重现性好，可作为尿毒康合剂质量控制的有效方法。 关键词：高效液相色谱法；尿毒康合剂；黄芪甲苷 中图分类号：11284　文献标识码：A　文章编号：1673―7717(2007)11―2367―02 尿毒康合剂是中山市中医院制剂室生产的纯中药制剂，是本院传统经验方，由黄芪、大黄、丹参等中药组成。具有排毒、化瘀、益气生血功能。对慢性肾功衰竭疗效较好。经多年临床验证，慢性肾衰患者经尿毒康合剂治疗后血浆sIL-2R水平明显下降，Scr降低，肌肝清除率Ccr上升，临床症状明显改善。黄芪为处方的主药，黄芪甲苷为主要活性成份之一，因此其含量的高低直接影响尿毒康合剂的质量。黄芪甲苷的测定方法有分光光度法、薄层扫描法和HPLC法。而HPLC法兼具有分离和分析功能，且流动相选择范围宽，具有准确、快速、重现性好、灵敏度高等优点。为有效控制尿毒康合剂的质量，本文采用HPLC法测定尿毒康合剂中黄芪甲苷的含量，方法简便、准确，为该制剂的质量控制提供可靠的检测方法。 1　仪器与试药 Agilent1100系列高效液相色谱仪，UV一254紫外可见分光光度检测定器，英特尔奔腾4数据处理器，BS-224s电子分析天平。十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。尿毒康合剂由本院院制剂室生产，规格：100mL／瓶，批号20060702黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇、乙腈为色谱纯，其余为分析纯。 2　方法与结果 2.1　色谱条件 色谱柱：Agjiersil ODS；流动相：乙腈：水(33:72)；流速：lmI／min；柱温：26℃；进样量：20μL；紫外检测波长：203nm；灵敏度：1.0AFUS。 2.2　供试品溶液的制备精密吸取尿毒康口服30mL，置分液漏斗中，用正丁醇提取3次，每次30mL，合并正丁醇液，用1％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次35mL，弃去氢氧化钠液，继续用水饱和的正丁醇溶液洗至中性，弃去水液，将正丁醇液于水浴蒸干，残渣加水5mL溶解，然后通过已处理好的C18小柱(依次以5mL甲醇，5mL水预洗)，以水3mL洗脱，弃去水液，再用80％甲醇溶液10mL洗脱，收集洗脱液、蒸干，残渣用甲醇溶解，并转移至lmL容量瓶内定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 2.3　阴性样品液的置 备另取缺黄芪的其他药材，按处方工艺制成缺黄芪的尿毒康阴性对照液，照2.2项下方法制备阴性样品液。 2.4　线性关系考察 精密称取黄芪甲苷对照品10.050mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.0050mg／mL的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL稀释至2.0mL，分别进样20μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为横坐标，黄芪甲苷对照品进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程得：Y=-0.2336+0.6458X，r=0.9998。黄芪甲苷在进样量内1.05～15μg线性关系良好。 2.5　精密度试验精密吸取对照品溶液10μL，连续进样5次，依法测定，黄芪甲苷峰面积积分值ILSD为0.97％(n=5)。 2.6　稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液(批号10μL，室温下放置，在配制后0、2、4、6、8、10、12h依次测定，结果在12h内的ILSD值为0.47％，表明供试品溶液在12h内稳定。 2.7　重复性试验按“2.2”项下方法分别制备5份供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算黄芪甲苷峰面积积分值的RSD为1.52％。 2.8　加样回收率试验 取已知含量样品(批号含量：0.0507mg／mL)10mL，加入适量对照品，按供试品制备方法制备，依上述方法测定。 3　讨论 尿毒康合剂能够降低CRF大鼠UTP、cr、BUN、P、UMA水平、升高血中Hb、Ca等水平，从而增强机体的排毒能力，减轻肾损伤，改善CRF大鼠的肾功能及免疫功能。黄芪是方中主要药物，现代药理学证实黄芪能够提高机体的免疫功能和抗病毒作用，具有显著的抗衰老和抗氧化作用。可提高淋巴因子白细胞介素-2，激活杀伤细胞(LAK)以提高对肿瘤杀伤效应。而其主要成分是黄芪甲苷，黄芪甲苷也是其主要活性成分之一。其含量的高低可作为黄芪质量控制指标。因其在尿毒康合剂中含量较低，且尿毒康合剂为复方制剂，因此干扰成分较