高效液相色谱法测定复方烟酰胺沙星软膏中烟酰胺含量.docVIP

高效液相色谱法测定复方烟酰胺沙星软膏中烟酰胺含量摘 要 目的：建立高效液相色谱法测定复方烟酰胺沙星软膏中的烟酰胺的含量。方法：采用ThermoExtend-C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；以甲醇-水（30∶70）为流动相；检测波长230nm；流速1.0ml/分；柱温：40℃。结果：烟酰胺在10.0～60.0μg/ml浓度范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.99995（n=6）；平均回收率为99.95%，RSD%=1.5%（n=6）。结论：方法结果准确，简便，可靠，可用于复方烟酰胺沙星软膏中烟酰胺的含量测定。? 关键词 复方烟酰胺沙星软膏 烟酰胺 含量测定 高效液相色谱法 复方烟酰胺沙星软膏为梅县慢性病防治院自制软膏制剂，其疗效显著，多年来为病者广为使用的外用软膏。但一直由于没有一个可行的质量控制标准而影响其质量稳定。本文从质量控制方面进行了研究，探讨了其主药成分烟酰胺的质量检验方法。 本品以烟酰胺为主药，并含有西咪替丁、氧氟沙星等成分，由于其紫外吸收存在较大干扰，故选用高效液相法测定烟酰胺含量。 仪器与试药 仪器：日本岛津LC-10AD型高效液相色谱仪，编号C20293310148J2。检测器：SPD-10A，编号C20333307271KG。色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，编号Thermo Extend-C18，4.6mm×150mm，5μm。 试药：复方烟酰胺沙星软膏(梅县慢性病防治站，批号060901、060904、060906)；烟酰胺对照品(中国药品生物制 品检定所提供，批号10115-0001)；甲醇(天津四友生物医学技术有限公司，色谱纯试剂)。 方法与结果 色谱条件：柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，编号Thermo Extend-C18，4.6mm 150mm，5μm。泵型号：LC-10AD，编号C20293310148J2。检测器：SPD-10A，编号C20333307271KG。流动相：甲醇-水（30∶70），进样体积20μl。流速：1.0ml/分。检测波长：230nm。柱温∶40℃。 系统适应性试验：经过采用上述下规定的色谱条件测定，并用色谱图对比，供试品与对照品在相应时间内有吸收峰出现，分离良好，分离度为2.5，理论指数为2800。阴性在此区间无吸收峰。 溶液的制备：①样品溶液的制备：取本品适量（约相当于烟酰胺5mg），精密称定。置烧杯中，加流动相适量。水浴上加热。不断搅拌使溶解，转移至100ml量瓶重，放冷加流动相稀释至刻度，滤过，并用0.45μm的微孔滤膜滤过，作为供试品。②对照品溶液的制备：取烟酰胺对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶重，加流动相溶解并稀释到刻度，摇匀，再精密量取上述溶液25ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 线性关系回归：取烟酰胺对照品（批号10115-0001，由中国药品生物制品检定所提供）9.99mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液，分别精密量取对照品储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml分别置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀为系列样品，分别取20μl注入色谱仪中，记录色谱图，以峰面积(A)为横坐标，相应浓度(C，μg/ml)为纵坐标进行线性回归，得回归方程：C=7.8×10-6A-0.50，r=0.99995（n=6），表明烟酰胺在10～60μg/ml浓度范围内具有良好的线性关系[1]。 阴性干扰试验：取缺烟酰胺的样品，精密称取0.5g，照上述方法制备阴性对照液，精密量取20μl注入色谱仪.结果在烟酰胺相应的保留时间位置上无干扰峰出现。 精密度试验：精密量取样品测定溶液连续进样4次，记录峰面积，相对标准偏差RSD%为0.1%（n=4），表明方法精密度好。 样品测定及稳定性试验：精密量取同一批号的供试品（批号：060901）溶液分别于0、2、4、6、8、12小时进样，记录峰面积，结果烟酰胺峰面积RSD为0.8%，表明12小时内供试品溶液稳定。 重复性实验：取同一批供试品（批号：060901）6份，按含量测定项下方法测定，结果该批样品烟酰胺平均含量为92.9%，相对标准偏差RSD%为0.71%（n=6）。表明该方法重复性好。 烟酰胺回收率试验：精密量取样品溶液5ml和对照品储备溶液2ml加入10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，取20μl注入色谱仪中，记录图谱，计算回收率（见表1）。 讨 论 本研究对复方烟酰胺沙星软膏的质量控制方法进行了全面研究。其中重点研究了该制剂中主药成分烟酰胺的含量测定方法。本研究用高效液