高效液相色谱法测定肾衰宁丸中大黄素及大黄酚含量.docVIP

高效液相色谱法测定肾衰宁丸中大黄素及大黄酚含量(辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600) 摘要：目的：采用高效液相色谱法测定肾衰宁丸中大黄素和大黄酚的含量。方法：应用C18色谱柱，甲醇一0.1％磷酸溶液(85:15)为流动相，检测波长254nm测定大黄素和大黄酚的含量。结果：平均加样回收率分别为95.3％～99.8％和95.1％～99.5％，RSD分别1.08％和1.76％。结论：该方法准确，灵敏度高，可以用于肾衰宁丸中大黄素和大黄酚的含量。 关键词：大黄素；大黄酚；高效液相色谱法 中图分类号：R285　文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)05-1057-02 肾衰宁丸具有益气健脾，活血化瘀，通腑泄浊的作用。用于脾失运化，瘀浊阻滞，升降失调所引起的腰痛疲倦，面色萎黄。恶心呕吐，食欲不振，小便不利，大便黏滞及多种原因引起的慢性肾功能不全见上述症候者。据报道，该药还具有降低肾大部切除大鼠脂质肾毒性，改善肾功能的功效。 大黄作为方中主要药味之一，主含大黄酚及大黄素等蒽酮类成分。参照2000年版中国药典大黄药材下，采用HPLC法测定了肾衰宁丸中大黄素及大黄酚的含量。实验结果表明，本法有效的排除了其它成分的干扰，能同时准确地测定成品中大黄素及大黄酚的含量，方法简便，重现性好，可作为肾衰宁丸的质量控制方法。 1仪器和试药 日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10A可见紫外检测器；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，DiamonsilTM C185μm，250mm×4.6mm；流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)；检测波长为254nm；柱温：25℃；流速：1mL/min。 2.2供试品溶液的制备 取装量差异项下本品适量，研细，精密称取1g，加25mL甲醇，称定重量，超声提取30min，称定重量，用甲醇补足损失重量，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。 2.3对照品溶液的制备 分别精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，分别加甲醇制成每1mL含大黄素10μg的溶液，每1mL含大黄酚20μg的溶液，即得。 2.4 阴性干扰实验 取除去大黄以外的其它药材，按样品制备方法制成阴性液。精密吸取供试品溶液、阴性液各10μL，大黄酚对照品溶液、大黄素对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图。由色谱图提示，在两种对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位元吸收，对本品中大黄酚和大黄素的含量测定无干扰，方法专属性良好。 2.5方法学考察 2.5.1线性关系考查　精密称取大黄素及大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所提供，含量测定用)13.26mg及10.01m8，分别置100mL容量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL注入高效液相色谱仪中，测定色谱峰面积，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。 大黄素标准曲线方程为Y=1881933X+4927.061，r=0.9997。由测定结果提示，大黄素进样量在0.02652～0.1326μg范围内线性关系良好。 大黄酚标准曲线方程为Y=2757470X-3143.1，r=0.9999。由测定结果提示，大黄酚进样量在0.04004～0.2002μg范围内线性关系良好。 2.5.2稳定性实验考察　取本品0.5g，精密称定，按2.2制成供试品溶液：精密吸取供试品溶液10μL，按0、2、4、6、8h时间间隔，分别进样分析，测定色谱峰面积，结果显示供试品溶液制备后8h内测定，大黄素和大黄酚的色谱峰的峰面积无明显变化，说明在此时间内，供试品溶液化学性质稳定。 2.5.3精密度实验　取本品适量，研细，取0.5g，精密称定．按2.2制成供试品溶液，精密吸取供试液10μL，共计5份，分别注入液相色谱仪中，测定大黄素及大黄酚峰面积，计算，大黄素RSD为0.35％，大黄酚RSD为1.26％。 2.5.4重复性实验　取本品适量，研细，取0.5g，精密称定，平行5份按2.2制成供试品溶液，结果表明本方法重现性好，大黄素及大黄酚的RSD分别为2.6％和2.9％。 2.5.5回收率实验①大黄素的回收率实验考察：取本品，研碎，取0.5g，精密称定，精密加人大黄素对照品5mL(浓度0.1644mg/mL)，按2.2制成供试品溶液，测定结果提示：本方法回收率在95.3％-99.8％之间，RSD为1.80％，符合有关规定。 2.5.6样品中大黄素及大