高效液相色谱法测定脑得安颗粒中葛根素含量.docVIP

高效液相色谱法测定脑得安颗粒中葛根素含量摘 要 目的：建立测定脑得安颗粒有效成分含量的方法。方法:采用HPLC对脑得安颗粒中葛根的含量进行测定。结果：葛根素在0.081~0.41μg之间具有良好的线性关系，平均回收率为100.05％，RSD=1.22％(n=5)。结论：该方法灵敏、重现性好，适用于脑得安颗粒中葛根的含量测定。 关键词 脑得安颗粒 葛根素 高效液相色谱法 心脑血管疾病是一种常见病、多发病，是当今威胁人类健康的最主要疾病之一，无论发病率还是死亡率均居各类疾病之首。根据有关文献报道，我国心血管疾病患者已超过1.5亿；每年死于心血管疾病患者高达300万人以上，约占因疾病导致死亡人数的50％。 中药脑得安颗粒临床上治疗脑动脉硬化，缺血性脑中风及脑出血后遗症等疾病效果比较好。脑得安颗粒由三七、川芎、红花、葛根等中药组成。具有活血化瘀，疏通经络，醒脑开窍的功效。为了控制脑得安颗粒的质量，保证临床用药效果，本实验建立了HPLC测定脑得安颗粒中葛根的方法。经方法学考察证实该方法特异性高，回收率和精密度好，结果满意。 资料与方法 仪器与试剂：Waters 600高效液相色谱仪；Waters 2487紫外-可见波长检测器；Breeze色谱工作站；十万分之一微量分析天平；葛根素购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯，脑得安颗粒由本院自制。 方法与结果：①色谱条件+{[1~2]}:色谱柱：EclipseXDB-C18(4.6×250mm,5μm)；流动相：甲醇：水(25∶75)；流速：1.0ml/分钟；柱温25℃；检测波长：245nm；进样量10μl。②对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品5mg，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。③供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，研细，取约1.0g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml,置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇定容至10 ml，摇匀，即得。④阴性对照品溶液的制备：按处方制备取不含葛根药材的样品颗粒剂，按供试品溶液的制备方法制成相应的阴性样品溶液。⑤线性关系考察：精密吸取葛根素对照品溶液2、4、6、8、10μl分别注入液相色谱仪，测定葛根素色谱峰面积。以葛根素的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=1.45×103+8.05×106x，r=0.9996。结果表明：补骨脂素在0.081-0.4μg之间具有良好的线性关系。⑥精密度实验：精密吸取同一供试品溶液(批号：050502)10μl，重复进样6次，分别计算葛根素的质量分数，结果其RSD分别为0.95％和1.08％。⑦稳定性试验：精密吸取对照品溶液10μl，分别于0、2、4、24、36小时测定峰面积，计算得葛根素峰面积的RSD分别为1.23％和1.88％，表明对照品葛根素在36小时内稳定。⑧重现性实验：取样品，精密称定5份，制备供试品溶液，进样测定计算葛根素的质量分数，其RSD为0.96％(见图)。 ⑨回收率实验：采用加样回收法。取批号为050501的样品5份，每份0.50g，置具塞锥形瓶中，各精密加入葛根素对照品0.08mg，制备供试品溶液，进样，测定。结果葛根素平均加样回收率为100.05％，RSD为1.20％。⑩样品测定：取3批脑得安颗粒制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，进样，测定，结果见表。根据结果，暂定本品以干燥品计，含葛根素含量不得少于4.0mg/g。 讨 论 流动相的确定：本实验曾选择乙腈-水溶液系统，结果不太理想，葛根的出峰区间有干扰，峰形欠佳。而采用本实验的色谱条件即甲醇水系统，葛根的峰形得到明显的改善，且干扰减少。 1