高效液相色谱法测定止痒消炎水中蛇床子素含量 .docVIP

高效液相色谱法测定止痒消炎水中蛇床子素含量 摘　要：目的：建立止痒消炎水中蛇床子素的含量测定方法。方法：采用HPLC法，以ZORBAX XDB―C18为色谱柱，甲醇一水(70:30)为流动相，检测波长323nm。结果：试验表明，蛇床子素在0.0165-0.264μg范围内呈良好的线性关系(r=1.00000)，平均回收率为100.47％，(RSD=0.94％)。结论：本方法简便，准确，可作为该制 关键词：高效液相色谱法；蛇床子素；止痒消炎水 　　 止痒消炎水为卫生部药品标准(中药成方制剂j第9册收载品种，主要由苦参、白鲜皮、蛇床子等组成，具有消炎止痒的功效，用于夏天皮炎，痱子，皮肤瘙痒等。原标准中仅收载了水杨酸和麝香草酚的薄层鉴别，未有定量分析方法。　　 蛇床子的主要有效成分为香豆素类化合物，具有广谱的抗菌特性，其活性最强成分为蛇床子紊，本文选择蛇床子素为指标成分，建立了止痒消炎水中蛇床子素的HPLC测定法，为该药的质量控制提供了定量评价方法。 1 仪器与试药 仪器：Agilent高效液相色谱仪1100系列，包括G1311A四元泵、G1322A在线脱气机、G1316A柱温箱、G1313A自动讲样器、G1314AVWD 检测器、Agilent Chen 化学工作站AG245电子天平(瑞士METrLER TOLEDO)；试剂：水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯；对照品：蛇床子素对照品，供含量测定用(批号：0822―9401)由中国药品生物检定所提供；样品：止痒消炎水(批号20040619，030810)由浙江台州施比林有限公司生产。阴性对照样品依照止痒消炎水的制备工艺自制，药材均由杭州市药品检验所标本室提供。 2　方法与结果 2．1 色谱条件色谱柱：Angilent ZORBAX XDB―C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇一水(70:30)；流速1.00mL/min；柱温：40℃；检测波长：323nm。 2．2 对照品溶液的制备精密称取蛇床子素对照品16.5mg置10mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度。再精密吸取1mL置100mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，即得。 2．3 供试品溶液的制备精密量取2mL，置50mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2．4 阴性对照溶液的制备缺蛇床子的阴性对照样品，按供试品制备方法制得阴性对照溶液。 2．5 专属性试验照上述色谱条件，精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μL分别注入液相色谱仪。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照液在此保留时间无干扰，表明方法专属性良好。结果见图1。 2．6 线性关系考察精密吸取蛇床子素对照品溶液1、2、4、6、8、10、12、14、16注注入液相色谱仪，按上述条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，蛇床子素进样量为横坐标(X)作回归方程，得：Y=61.76726X―0.334622，r=1.00000，表明蛇床子素进样量在0.0165-0.264p,g范围内有良好的线性关系。 2．7精密度试验精密吸取蛇床子素对照品溶液10μL，按上述色谱条件测定，重复进样10次测定峰面积，结果RSD为0.09％(n=10)，表明仪器精密度良好。 2．8稳定性试验精密吸取供试品溶液10μL，按上述色谱条件测定，在28h内每隔一定时间进样1次，测定峰面积，结果RSD为0.38％(n=9)，表明样品在28h内稳定。 2．9 重复性试验 取同一批样品(批号：030810)按供试品溶液制备方法平行制备8份，各精密吸取10μL，按上述色谱条件测定，外标法计算蛇床子素的含量，结果该批样品中蛇床子素的平均含量为0.3576mg/mL，HSD为0.31％(n=8)，表明本法重现性较好。 2．10 回收率试验采用加样回收法，精密量取样品(批号：030810)9份各1mL，置50mL量瓶中，分别精密加入0.066mg/mL蛇床子素对照品溶液4.0、4.0、4.0、5.0、5.0、5.0、6.0、6.0、6.0mL，加无乙醇水至刻度，摇匀，精密吸取10μL，按上述色谱条件测定峰面积并计算含量，结果平均回收率为100.47％，RSD为0.94％(n=9)，表明本法具有良好的回收率。结果见表1。 2．11 样品测定精密吸取供试品溶液10μL，按上述色谱条件测定峰面积，分别测定3批样品，按外标法计算蛇床子素的含量。结果见表2。 3 讨论 3．1 波长的选择经对蛇床子素进行紫外区光谱扫描，表明蛇床子素在323nm波长处有最大吸收，故选用该波长为测定波长。 3．2样品的处理