高效液相色谱法测定川葛颗粒中葛根素含量.docVIP

高效液相色谱法测定川葛颗粒中葛根素含量关键词 高效液相色谱法 川葛颗粒 葛根素 资料与方法 仪器：LC-2010A型高效液相色谱仪，SPD-10AVP紫外检测器。 试药：葛根素对照品,由中国药品生物制品检定所提供（批号：725-200108，供含量测定用）。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。 色谱条件与系统适用性试验：①色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（25∶75）为流动相；检测波长为250nm。理论板数按葛根素峰计算应不低于5000。②对照品溶液的制备：取葛根素对照品约10g，精密称定为9.04mg，置100ml量瓶中，加30％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置20ml量瓶中，加30％乙醇至刻度，摇匀，即得。③供试品溶液的制备：取本品装量差异项下内容物，研细，混匀，取约1g，精密称定置具塞锥形瓶中，精密加入30％乙醇50ml，称定重量，超声处理（功率100W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。④测定法：精密吸取对照溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。⑤空白试验：按供试品溶液制备时取样量，折算成处方中除葛根外其他药材的取样量，按制法制成空白颗粒，再按供试品溶液制备方法制成空白溶液。取一定量的对照品、供试品及空白溶液，按上述色谱条件审查，结果供试品及对照品溶液在相应的保留时间处有吸收峰，而空白溶液无吸收，说明空白溶液无干扰。 结 果 方法学考察:线性关系的考察：精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20μl,按上述色谱条件分别注入液相色普仪，测定峰面值，以峰面积积分值为纵坐标，以进样量为横坐标，结果见表1。 回归方程：Y＝4343279.44X＋2667.00，γ＝0.9999[LL] 试验结果表明：葛根素对照品在进样量0.0904～0.9040μg范围内，才能与峰面积呈良好的线性关系。 精密度试验：吸取对照品溶液10μl，连续进样5次，依法测定，结果见表2。 由上所示，本方法有良好的精密性。 稳定性试验：取批号050508样品，同一供试品溶液，依法测定，相隔一定时间进样一次，试验结果表明，葛根素在供试品溶液中24小时内是稳定的。 重现性试验：取批号050504样品，依正文方法独立操作5份，结果见表3。 试验结果表明：重现性较好。 加样回收率试验：取批号为050504样品，已知平均装量为10.0087g/袋，每袋含葛根素11.7765mg，即每g含葛根素为1.1766mg，取装量差异项下的本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加30％乙醇50ml，精密加入对照品溶液2ml（对照品浓度为0.301mg/ml），超声处理，以下同正文操作，制成供试品溶液，依法测定，结果见表4。 以上方法学考察证明：本含量测定方法具有一定的精密性、准确性与稳定性，方法简便可行。 样品测定：按正文方法测定3批样品的含量，结果见表5。 本品每袋含粉葛及葛根素计，不得少于8.0mg。 讨 论 经系统实用性试验，选择测定波长。取一定量的对照品溶液，经分光光度计在200～400nm波长范围内进行光谱扫描，在215nm处有肩峰，250nm处有最大吸收峰，320nm处有较小吸收峰，根据紫外吸收图及参考相关文献，经空白试验，选择250nm为测定波长。流动相选择甲醇-水（25∶75）为流动相，流速1ml/分钟,柱温为30℃。 参考文献 1 国家药典委员会.中国药典(2005年版一部).北京：化学工业出版社,2005,附录VI D：附录33 1