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hplc-ecd法测定小鼠脑内去甲肾上腺素条件的优化及对去甲肾上腺
HPLC-ECD法测定小鼠脑组织内去甲肾上腺素的含量
石亮，郭延垒，张有金，王二豪，李文娟，于超*
（重庆医科大学 生命科学研究院 重庆 400016）[基金项目]
[作者简介]硕士，研究方向：药物代谢与动力学，E-mail:[通讯作者] 于 超（1963-），教授，研究方向：药物代谢与动力学，Tel:023 E-mail:yuchaom@163.com
70 % 高氯酸沉淀蛋白后，以HPLC-ECD法进行分析。使用汉邦lichrospher C18色谱柱，流动相为醋酸钾缓冲液-甲醇=95:5（V/V，pH4.5），流速为1.0 ml/min，温度为25 oC；电化学检测器电压为0.6 V，电流为100 nA,频率为0.05 Hz。结果：去甲肾上腺素在0.1μmol/L~25 μmol/L范围内线性关系良好，检测下限为17 ng/mL，日内、日间RSD分别小于7.81 %和3.61 %，回收率为75.05 %，测得小鼠脑内去甲肾上腺素含量为8.94±0.71 μg/g。结论: 该方法快速、准确，适用于小鼠脑内去甲肾上腺素的测定。
关键词：高效液相色谱-电化学；小鼠脑组织；去甲肾上腺素
Determination of Norepinephrine in mouse brain by HPLC-ECD
Shi Liang, YU Chao*
(Institute of Life Sciences, Chongqing Medical University, Chongqing 400016，China )
Abstract Objective:To develop a HPLC-ECD method to determine norepinephrine in mouse brain. Methods:The supernatants of protein-precipitated mouse brain tissue homogenates by 70 % HClO4 were analysised by HPLC-ECD method.Hanbon lichrospher C18 column was used for separation. Potassium acetate buffer :methanol=95:5(V/V,pH4.5) was used as mobile phase.The flow rate was 1.0 ml/min.The column temperature was 25 oC.The detector voltage,current and frequency value were setted as 0.6 V, 100 nA and 0.05 Hz respectively. Results:Norepinephrine have good linearity within the range of 0.1μmol/L~25 μmol/L.Within-day and between-day precisions of the method were less than 7.81 % and 3.61 % respectively.The recovery of norepinephrine was 75.05 %.The detection limit was 17 ng/mL.Conclusion:The method is fast,simple and accurate in the determination of norepinephrine.
KEY WORDS: HPLC;electrochemical;mouse brain;norepinephrine
单胺类递质去甲肾上腺素（NE)在大脑许多功能的调控中起到重要作用，其在中枢神经系统中参与脑缺血，镇痛，学习记忆等多种生理过程。有研究表明去甲肾上腺素参与了脑血管疾病的发病机制[1]，且与脑水肿的产生密切相关[2,3]。去甲肾上腺素还可能参与了抑郁症的发病机制[4,5]。因此准确测定脑内去甲肾上腺素的含量具有很重要的意义。
文献报道中去甲肾上腺素含量的测定方法主要有高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD) [6,7]，HPLC-UV法[8]和HPLC-ECD法等。但是HPLC-HPLC-UV法虽简便易行但灵敏度较HPLC-ECD法低，检测范围小；HPLC-ECD法虽灵敏度较高，但电化学检测器的运行参数极难控制，通常需经复杂的优化才能达到最佳的检测效果，暂无见相关参数优化的报道。本文在已有的HPLC-ECD法[9,10]的基础上对去甲肾上腺素的相关测定方法及小鼠脑组织样品处理方法进行了详细且
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