肌肉注射sRAGE基因对STZ诱导高脂餐大鼠2型糖尿病发病影响.pdfVIP

2型糖尿病发病的影响 硕士研究生：苏旭东 指导教师：苏本利 教授 专业名称：内科学 摘 要 背景 高脂肪饮食已经成为当前主要的饮食结构，与己成流行趋势 的2型糖尿病发病相伴随。高温烹制的高脂肪餐富含晚期糖基化终末产物 (Advancedend glycation (insulin 测：长期进食富含AGEs的食物，使循环中AGEs超过了机体的清除能力； 系统可能有助于阻断糖尿病的发病过程。 目的 构建大鼠可溶性RAGE(soluble 体，观察sRAGE表达对高脂镊诱导的大鼠体内氧化水平以及对大鼠糖尿 病发病率的影响。 方法 1．sRAGE基因克隆及表达载体构建从大鼠肺组织中提取总RNA， 根据其编码区基因设计引物，并在引物中加入＆，I和ClaI酶切位点： Vector中筛选阳 行RT．PCR，将RT．PCR产物克隆到pMDl8-T simple 8．sRAGE， (sRAGE)测序。 2．质粒扩增与纯化 pLNCX2，碱裂解法提取质粒。 取雄性 转染效率：一周后处死动物，取注射部位肌肉提取总RNA，并使用 4．1预实验 雄性SD大鼠12只(体重l 分为3组，每组4只： 大鼠于转染质粒前以及转染后每一周取血，检测血清超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)。 4．2正式实验 随机分为2组(每组10只)： 大鼠在转染第一次质粒3周时重复注射质粒一次，剂量同上；分别于2 评价其体内的氧化水平。 方 糖，以空腹血糖≥7，0mmol／L为达到糖尿病诊断标准。 6．高脂喂养的大鼠不同处理组血胰岛素水平及胰岛胰岛素含量情 况 以及血糖水平。注射STZ一周后处死大鼠，取胰腺固定，石蜡切片，行 胰岛素免疫组化染色，观察胰岛细胞胰岛素分泌情况。 结果 1．酶切和测序证实构建的sRAGE基因表达载体序列正确。 可以检测到sRAGE的mRNA表达。 vJ 学差异t=0．120，p=0．906)。 v5 6．79， 持续3周，第2周起的水平与对照组相比有统计学差异(5，36 vJ 有统计学差异(152 平仍然可以下降，趋势同前；SOD水平则继续升高，但在第二次转染后 2周后达到一定水平后则不再升高。 值有统计学差异。 鼠的血清胰岛素水平明显低于PLNCX2组大鼠，但高于普通饮食的同龄 大鼠。 7．大鼠胰岛免疫组化染色显示高脂喂养的2组大鼠胰岛分泌胰岛素 大鼠胰岛结构更加完整，胰岛素含量更接近普通饮食大鼠。 结论 粒在大鼠骨骼肌成功内表达。 减轻氧化应激水平、减少STZ诱导的高脂餐大鼠糖尿病的发病率。 关键词：晚期糖基化终末产物 太鼠 高脂餐 氧化应激 糖尿病／2型 IntramuscularofsRAGE the injecfion geneprevents inrats