H3亚型禽流感病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

14 中国兽医杂志 2015 年(第51 卷)第 10期 Chinese Journal of Velerinary Medicine H3 亚型禽流感病毒工温式 RT-PCR 检测方法的建立及初步应用 刘婷婷1 ，谢芝勋2 ，宋德贵1 ，罗思思2 ，谢丽基2 ，李 孟2 ，谢志勤2 ，邓显文2 (1.广西师范大学生命科学学院，广西桂林 541000 ; 2. 广西兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁 53∞01) 摘要:为建立快速、准确检测H3 亚型禽流感病毒(AIV) 的方法，根据GenBank 中 H3 亚型AIVHA基因序列，设计出 1 对特异性引物，通过优化反应条件建立了旧亚型AIV 二温式RT-PCR 检测方法。对该法进行特异性、敏感性检测，并 对256 份临床样品进行检测。结果表明，该法只能扩增H3 亚型AIV ，对其他亚型AIV 及常见禽病病原体不扩增;对H3 4 亚型AIV 检测下限为 lxl0 L;2S6 份临床样品检测结果与病毒分离鉴定结果一致。与普通RT-PCR 相比该法节 拷贝巾 省了30 min ，表明所建立的H3 亚型AIV 二温式RT-PCR 方法是一种快速、简便和特异的检测方法。 关键词:H3 亚型AIV ;二温式RT-PCR; 检测 中图分类号: S854.43 文献标志码:A 文章编号:0529-6005(2015)10-0014-03 Dule-temperature RT-PCR for diagnosis ofH3 Subtype Avian Inftuenza Virus 1 2 1 2 LIU Ting-ting , XIE Zhi-xun , SONG De-gui , LUO Si-si , 2 2 2 2 XIE Li才i , LI Meng , XIE Zhi-qin , DENG Xian-wen ( l. Guang直i Nonnal University ,College oflife science ,Guilin 541000 ,China ; 2.Guangxi Veterinary Research Institute ,Guangxi Key Laboratory of Animal Vaccines and New Technology ,Nanning 530∞1 ， China) Abstract: In oroer ωestablish a rapid and accurate method to detect H3 subtype avian influenza virus ( AIV) • a pair of specif- ic primer were designed according to the sequences of the hemagglutinin ( HA ) genes of H3 subtype AIV in GenBank. Then the re- action conditions were optimized and a Dule-temperature RT-PCR was established. The results showed that this Dule-temperature RT-PCR was only specific for the H3 subtype AIV without amplification of the