一步法多重荧光定量RT-PCR检测人杯状病毒的建立及应用.pdfVIP

临床检验杂志2014 年9 月第 32 卷第9 期 Chin J Clin Lab Sci ,Sep. 2014 ,Vo1. 32 ,No.9 .647. DOI: 10. 13602/j. cnki. jcls. 2014.09.02 ·临床检验执木研究· 一步法多重荧光定量 RT-PCR 检测人杯状病毒的建立 及应用* 王原1 气崔大伟3 ，胡正军2 ，陈功祥l 片(1.浙江大学医学院，杭州 310058;2. 浙江中医药大学附属第一医院检验 科，杭州 310016;3. 浙江大学医学院附属第一医院检验科，杭州 310003;4. 浙江大学医学院附属第二医院检 验科，杭州 31ω09) 摘要:目的 建立检测人杯状病毒(human ca1icivirus , HuCVs ，主要包括 SV 、 NoV-G 1 和 NoV-GII )的一步法多重荧光定量 RT­ PCR( rRT-PCR) 法。方法 用 Primer Express 3. 0 软件设计特异性引物和探针，通过合成的对应病毒基因的质粒来评价该方法 的灵敏度、特异性和重复性，检测临床标本并对阳性结果进行基因测序验证。结果 建立的 rRT-PCR 法检测 SV 、 NoV-G 1 和 3 NoV-G 11 的灵敏度均达到 10 copies/mL ，特异性为 1∞%，且变异系数(CV) 均豆1. 275% 0 HuCVs 检出率为21. 431串 (75/350) , 其中 SV 、 NoV-G 1 和 NoV-GII 分别为 14.671毛( 11/75) 、 2 1. 33% ( 16/75) 和 64. ∞% (48/75) 。随机选择检测阳性结采进行测 序，结果均与该法检测结果一致。结论 建立的 rRT-PCR 法可同时检测并区分 SV 、 NoV-G 1 和 NoV-G 11 病毒，可用于 HuCVs 引起的急性腹泻散发和暴发疫情的监测。 关键词:人杯状病毒;札如病毒;诺如病毒;一步法多重荧光定量聚合酶链反应 文献标志码:A 中固分类号:R446.5 Establishment and appliωtion of one-step multiplex real-time RT-PCR 部say for the detection of human calicivirus l 2 3 2 l 4 WANG Yuan • , CU/ Da-wei , HU Zheng-jun , CHEN Go唔-xiang • (1. School of Medicine , Zhejiang University , Hangzhou 31∞58 ， Zhejiang; 2. Department of Clinical Laboratory ， 即 First Æ庐liated Hospital of Zhejiang Chinese Medicine University , Hangzhou 31∞16 ， Z.问;iang; 3. Center of Clinical Labora.ωη，即 First A庐liated Hospital , College of Medicine , Zhejiang University , H，α咆Z加u 310003 , Zhejia唔; 4. Depart附nt of Clinical Laboratory , the Second 明liated Hω， :pital ， College of Medicine , Zhejiang University , Hangzhou 31侧9 ， Z.树iα晤， China) Abstract: Objec创刊 To establish a one-step multiplex rea1 -time RT-PCR (rRT-PCR) method for detecting human ca1icivirus (HuCVs) , such as sapovirus (SV) , norovirus (NoV) -GI a