兔病毒性出血症病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用.pdfVIP

• 86 • 中国畜牧兽医 2013 年第 40 卷第 5 期 生物技术 兔病毒性出血症病毒巢式 RT-PCR 检测方法 的建立及应用 王景儒 (辽宁朝阳工程技术学校，辽宁朝阳 122000) 摘要:为建立一种快速的兔病毒性出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus ,RHDV)病原检测方法，本研究根据 Gen Bank 上登录的 RHDV VP60 基因序列，设计合成内外 2 对引物，优化 PCR 反应条件，建立了检测 RHDV 的巢式 RT-PCR 方 法。该方法对兔轮状病毒、仙台病毒、健康兔肝脏组织的扩增结果均为阴性;该方法第 1 次扩增的敏感性是 10 吨，第 2 次扩增 的敏感性是 O. 1 吨，第 2 次比第 1 次扩增的敏感性高 100 倍。建立的巢式 RT-PCR 方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等 优点，可以准确快速检测出极低含量的 RHDV，将为兔病毒性出血症的病原检测及分子流行病学调查等提供一种快速、简单、 高效、特异、灵敏的检测方法。 关键词:兔病毒性出血症病毒a 巢式 RT-PCR;检测 中图分类号:S858.291 文献标i只码 :A 文章编号: 1671-7236 (2013 )05-0086-04 兔病毒性出血症病毒(rabbit hemorrhagic dis- 扩散到世界各地，中国农业部将其列为二类动物疫 ease virus ,RHDV) 属于杯状病毒科(Caliciviridae) 病，每年都给全球养兔业造成了巨大的经济损失(刘 兔病毒属(Lagovirus) ，为单股、正链 RNA 病毒，其 胜江等， 1984; Moss 等， 2002; Oem 等， 2009; Le 基因组全长 7437 个核昔酸(Clarke 等， 1997; Kin Gall-Recule 等，201 1)。为有效合理控制 RHDV 的 near 等，2010; Tian 等，2011) 。由 RHDV 引起的兔 发生与流行，急需加强 RHDV 诊断技术的研究工 病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease , RHD) , 作。而 RHDV 常规的病毒分离鉴定、电镜观察、血 是一种兔类高度致病、致死的急性、烈性、毁灭性传 凝(血凝抑制)试验等方法存在操作复杂、费时费力、 染病，RHD 感染兔可通过皮肤、呼吸系统、生殖系统 敏感性低等缺点，不能满足 RHDV 快速诊断的需 向外排毒，具有传播速度快、发病率高、死亡率高等 要。鉴于此，本研究建立了一种简单、快速、敏感、特 特征(金明兰等， 2012; 王印等， 2011 ;隋慧， 2012) 。 异的 RHDV 巢式 RT-PCR 分子生物学检测方法， 该病于 1984 年在中国江苏部分县市首次暴发，现已 为 RHDV 的早期诊断、流行病学调查等提供一种有 效的检测技术手段。 收稿日期 :2012-10-06