多西紫杉醇对人鼻咽癌细胞系CNE-Ⅰ的放射增敏运用.pdfVIP

中国医科大学 硕士学位论文 多西紫杉醇对人鼻咽癌细胞系CNE-Ⅰ的放射增敏作用 姓名：唐秋 申请学位级别：硕士 专业：肿瘤学 指导教师：李光 2002.4.1 中文摘要 前——莒—～一 最近人们发现某些抗肿瘤药物除了具有细胞毒性作用外，可 能还有放射增敏作用。由于抗肿瘤药物作为放射增敏剂在临床应 用时，有其它药物不可比拟的优越性，因此受到肿瘤放射治疗界的 广泛重视。目前作用子微管的紫杉类新型抗肿瘤药物较多，其中 对泰素放射增敏作用的研究较多，而且各家的报道差异很大，有关 多西紫杉醇放射增敏作用的研究报道较少见。本实验采用细胞集 落形成方法来研究多西紫杉醇对鼻咽癌细胞系CNE．I有无放射增 敏作用及其放射增敏作用与其作用时间和浓度的相关性，从而为 今后临床使用多西紫杉醇作为放射增敏剂提供理论依据。 、、、／实验材料 1、细胞系：人鼻咽癌细胞系CNE—I，由中国预防医学科学院 病毒研究所提供。 冷藏保存。实验前将药物用PRMIl640培养液配制成所需的浓 度。 3、主要试剂：PRMll640培养液，内含10％新生小牛血清。胰 酶，PBS液。 4、主要仪器：二氧化碳培养箱、倒置显微镜、微量加样器和血 球计数器由中国医科大学细胞生物实验室提供。PRIMUS直线加 速器由中国医科大学放疗科提供。6cm塑料平皿，由华美生物制 品有限公司提供。 实验方法 将人鼻咽癌细胞系CNE—I置于37。C，5％CO：培养箱内，用含 10％新生小牛血清的PRMll640培养液在培养瓶内单层传代培 养，取指数生长期细胞进行实验。 实验分组： 阴性对照组：培养皿内只接种瘤细胞，不做任何处理； 阳性对照组：即单纯用药组，采用不同浓度的药物作用不同的 时间； 单纯放射组：分别照射l、3、5、7、9Gy： 多西紫杉醇加照射组：不同浓度药物作用不同时间后，立即除 去药物，然后照射1、3、5、7、9Gy。 每平皿内接种细胞数因药物浓度、药物作用时间、照射剂量不 同而不同，接种细胞数要使形成的集落数达到100—200个为宜。 实验步骤： (1)多西紫杉醇药物毒性测定 取处于指数生长期的CNE—I细胞，胰酶消化计数，将细胞接种 于6cm平皿中，每平皿接种400个细胞，贴壁培养12小时后，吸出 培养液，分别加入用PRMll640培养液配制好的多西紫杉醇，浓度 X ml、1 个平行样。药物作用3小时后，立即除去药物，并用PBS液洗涤 细胞2次，重新加入不含药物的新鲜培养液8ml，置于培养箱中培 养14天，固定染色后计数细胞集落数，计算出集落形成率。实验 重复2次，取2次平均值，以多西紫杉醇药物浓度负对数为横坐 标，以存活率为纵坐标，绘出多西紫杉醇的剂量．效应曲线，推算出 多西紫杉醇的ID35、ID50、ID70和ID90。 ·2· (2)不同浓度多西紫杉醇作用相同时间对CNE—I细胞放射 敏感性的影响 究。将培养瓶内指数生长期的CNE—I细胞胰酶消化，计数活细胞 数，逐级稀释后将细胞接种6cm平皿中，贴壁培养12小时。吸出 培养液，用药组分别加入含有不同浓度多西紫杉醇(1×10“mg／ 入不含药物培养液5ml，继续培养3小时后立即除去药物，并用 PBS液洗涤细胞两次，加入不含药物培养液5ml。然后单纯照射 6MV X线分 组和药物加照射组用剂量率200cGy／min，SSDl00cm 别照射1、3、5、7、9Gy。照射