大肠杆菌和内毒素对兔胆汁中的游离脂肪酸含量的影响.pdfVIP

中国医科大学 硕士学位论文 大肠杆菌及内毒素对兔胆汁中的游离脂肪酸含量的影响 姓名：宋文渊 申请学位级别：硕士 专业：外科学 指导教师：吴硕东 中文摘要 ／前 言 胆色素结石的形成与细菌有密切关系，其中大肠杆菌的作用 尤为重要，这已为细菌学、形态学、分子生物学方面的研究所证实， 但其作用机制仍未完全阐明。有关研究表明，在成石性胆汁及胆色 素结石内均有一定数量的游离脂肪酸和细菌内毒素的存在。内毒 素作为细菌的主要致病物质，在胆石病的发病过程中具有重要作 用。胆石中的游离脂肪酸主要来源于胆汁中磷脂的水解，而这一过 程需要磷脂酶的参与。磷脂酶A、磷脂酶B、磷脂酶C均有水解磷 脂产生游离脂肪酸的活性，其来源有胆汁中的细菌、返流的胰液、 胆囊及胆管上皮细胞和白细胞。本研究制作兔胆道急性感染及部 分梗阻的动物模型并以气相色谱法测定兔胆汁中的游离脂肪酸含 量，观察大肠杆菌及内毒素对兔胆汁中的游离脂肪酸含量的影响； 同时根据酶水解的专一性，推测磷脂酶的来源。这对于揭示胆色素 结石的形成机制具有重要意义。 i j实验材料 I ． 选取日本大耳白兔15只，3～4月龄，体重为2．5～3．5kg，雌 雄不限。随机分为对照组、大肠杆菌组、内毒素组，每组五只。脂肪 酸标准品购自美国Allench公司及Sigma公司。内毒素及大肠杆 菌菌株分别由Sigma公司和中国药品生物制品检定所提供。 实验方法 846合剂按0．2～o．3ml／kg的剂量局部麻醉后，经肋缘下斜 切口入腹，纵行切开十二指肠壁3～4厘米，在肠管的后外侧找到 十二指肠乳头，然后插入直径lmm的前端剪有侧孔的硅胶管，直 至左右肝管汇合处并见有草绿色胆汁流出后，在胆总管中段以丝 ·1‘ 线结扎固定后引出腹壁，关腹术闭。对照组经引流管注入生理盐水 0．5毫升，大肠杆菌组、内毒素组分别注入大肠杆菌0。B。菌液(2 ×108cfu／m1)和内毒素溶液(50 Jug／m1)各0．5毫升。然后闭管并于 六小时、八小时后收集胆汁2毫升，加入异丙醇8毫升去蛋白后， 一20℃下贮存于有塞试管内待测。 胆汁中的游离脂肪酸含量以气相色谱法测定，采用内标法定 量，内标物为21碳酸。主要步骤包括以下方面：胆汁、异丙醇混合 液1毫升在Nz下吹干；用庚烷、异丙醇混合液反复提取三次后取 上层N：吹干；加内标物、乙醚后重氮甲烷甲酯化，在有塞试管内 型气相色谱仪测定游离脂肪酸的含量。 结 果 大肠杆菌组术后六小时、Ad,时软脂酸含量分别为0．0462士 酸的含量增加并不显著。内毒素组术后六小时、八小时软脂酸含量 与对照组比较显著增高(P0．01)，硬脂酸的含量分别为0．0429 差异(Po．05)，不饱和脂肪酸的含量则无明显差异。此外大肠杆 菌组、内毒素组术后八小时游离脂肪酸含量均比六小时的游离脂 肪酸含量有所增加，但无统计学上的差异。 讨 论 内毒素作为胆道细菌感染时的主要致病物质，实质上是细菌 -2· 细胞膜上的脂多糖，具有抗原性。它的作用机理包括：破坏单核吞 噬细胞系统，使细胞溶酶体膜破裂，造成细胞损伤；通过影响氧化 磷酸化偶联过程，使能量代谢发生障碍；并引起一系列病理生理改 变，如发热，降低血压，血细胞和白细胞减少等。通过上述作用内毒 素使胆道局部和全身发生一系列生理、生化改变，但迄今为止，