- 25
- 0
- 约4.07千字
- 约 4页
- 2017-08-29 发布于重庆
- 举报
四川大学2013博士学位研究生入学考试试题微生物学3088
四川大学2013博士学位研究生入学考试试题
代码:3088 科目:微生物学
论述题
以干扰素或白介素生产为例,阐述生物技术药物的生产过程。
答:生物技术药物(也称基因工程药物),指以DNA重组技术(包括基因工程技术、蛋白质工程技术)生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长因子类药物。
细胞因子干扰素类:主要有干扰素-α。干扰素-β和干扰素-γ。干扰素-α又有α1b,α2a,α2b等。
生物技术药物的生产可分为上游和下游两个阶段,上游阶段是指构建稳定高效表达的工程细胞(或工程菌),主要包括目的基因的分离,工程菌的构建和筛选。下游阶段是指工程菌的大规模培养一直到产品的分离、纯化、制剂、质量控制等一系列工艺过程。
基本流程如下:
获得目的基因→构建重组体→构建基因工程菌(或工程细胞)→大规模培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→制剂→成品检定→包装
以干扰素为例:
获得具有遗传信息的干扰素目的基因
从复杂的生物体基因组中采用不同方法分离并获得带有干扰素目的基因的DNA片段。获得目的基因主要通过下述方法。
①用限制性内切酶法直接分离干扰素目的基因
②人工合成目的基因:3种途径
A.酶促方法:经提取获得编码基因的信息RNA(mRNA),在逆转录酶的作用下,合成互补DNA(cDNA)链,在DNA聚合酶I的作用下,加工成为双链DNA分子。
B.化学合成法:前提是必须已知基因的核苷酸序列,化学合成的DNA片段一遍较短,需要用DNA连接酶进行连接,从而获得较长的DNA片段。
C.聚合酶链反应(PCR):先决条件是必须已知基因的核苷酸序列,根据序列设计引物,进行PCR扩增获得目的基因。也可采用反转录PCR(RT - PCR)等方法,直接从富含目的基因的实验材料提取RNA,在逆转录酶的作用下获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增获得目的基因。
③构建基因组文库从cDNA文库分离目的基因
选择基因载体构建重组DNA
在体外将含干扰素目的基因的DNA片段和具有自我复制功能、并带有选择标记的载体分子进行酶切连接,获得重组DNA分子。常用的基因载体有质粒,噬菌体,黏粒,病毒载体等。
将重组DNA分子导入宿主细胞
采用特定的方法将重组DNA分子转移至适当受体细胞(也称寄主细胞),并与之同步增殖。
鉴定带有干扰素目的基因的克隆
从大量的细胞繁殖群体中,筛选出克隆有重组DNA分子的寄主细胞。为了挑选出重组子,针对不同基因的表达产物,采用各自特有的测活方法确定其生物活性;也可以采用酶联免疫法确定其抗原性;以目的基因为探针,通过DNA杂交方法可以直接确定重组子。
目的基因的扩增及获得目的产物
培养克隆有目的基因的重组子,提取获得扩增的目的基因以进行深入的研究。将目的基因克隆至适当的表达载体,采用特定的方法将基因导入受体细胞,使其在新的遗传背景下获得活性表达,从而得到人类需要的特定目的物质。
大规模培养工程菌:
基因工程菌的培养过程主要包括
①通过摇瓶操作了解工程菌生长的基础条件,如温度、pH、培养基各种组分以及碳氮比,分析表达产物的合成、几类对受体菌的影响。
②通过培养罐操作确定培养参数合控制的方案及顺序。由于工程菌生长和异源基因表达之间有着较大的差异,各培养参数在全过程中必须分段控制。在不同的发酵条件下,工程菌的代谢途径也不一样,因而对下游的纯化工艺会造成不同的影响。因此在高表达高密度发酵的前提下,还要尽量建立有利于纯化的发酵工艺,以提高产品的纯度及改善其性质。
根据研制产品的物理化学性质,选择合理的分离纯化方法。
合理的纯化步骤包含3个方面:①纯化步骤少②产物的纯度、活性及其他检测指标达到规定要求③得率高
剂型、配方、规格和稳定性
药剂一般选择冻干剂型,其次要确保药剂的稳定性。
阐述苏云金芽孢的杀虫机理及提高杀虫效力的途径。
答:B . t 的毒素成分是多种多样的 , 不同亚种菌株产生的毒素种类和性质亦不相同 , 表现出不同的杀虫活性。总的说来,伴胞晶体蛋白δ-内毒素是其杀虫活性的主要来源。除此之外还有α-外毒素、β-外毒素、γ-外毒素不稳定外毒素以及水溶性毒素等,芽孢在杀虫过程中也起一定的作用。
δ-内毒素即伴胞晶体,它是B . t 杀虫的主要毒素成分,其形态发生是在前芽孢形成的第III阶段,即前芽孢内卷时靠近芽孢外膜处,开始形成伴胞晶体。其形态及大小有多种多样,有菱形、方形和不规则形等。根据伴胞晶体的杀虫范围及基因序列的同源性将其分为两类 :
一类为Cry,一类为Cyt。一般认为δ-内毒素的作用方式为:溶解、酶解活化、与受体结合、插入和孔洞或离子通道形成5个环节。具体说来,就是δ-内毒素被昆虫取食后,在昆虫中肠内溶解为前毒素,经中肠蛋白酶水解,释放出的活性成分与中肠上皮细胞刷状缘膜的受体结合,进一步插入膜内形成孔洞或通道,引起一系列
您可能关注的文档
- 17春《美学》作业2含答案.docx
- 84消毒液性质的探究.doc
- A4试题2012.doc
- 8SF6泄露应急预案演习策划书.doc
- 824计算机辅助制造-第一章.docx
- 9-3钢铁的锈蚀与防护.doc
- B1钢结构锈蚀处理和防腐方案.docx
- ASME中国制造-中英文计算书-永业.doc
- ADR控制系统在重型车上的应用.doc
- b基于植物生理需水的智能装置研究.doc
- 广东省广州省实验中学教育集团2025-2026学年八年级上学期期中考试物理试题(解析版).docx
- 广东省广州大学附属中学2025-2026学年八年级上学期奥班期中物理试题(解析版).docx
- 广东省广州市第八十六中学2025-2026学年八年级上学期期中物理试题(含答案).docx
- 广东省广州市第八十九中学2025-2026学年八年级上学期期中考试物理试题(解析版).docx
- 广东省广州市第二中学2025-2026学年八年级上学期期中考试物理试题(含答案).docx
- 广东省广州市第八十六中学2025-2026学年八年级上学期期中物理试题(解析版).docx
- 广东省广州市第八十九中学2025-2026学年八年级上学期期中考试物理试题(含答案).docx
- 广东省广州市第二中学2025-2026学年八年级上学期期中考试物理试题(解析版).docx
- 2026《中国人寿上海分公司营销员培训体系优化研究》18000字.docx
- 《生物探究性实验教学》中小学教师资格模拟试题.docx
原创力文档

文档评论(0)