葡萄糖对血管内皮细胞内皮抑素表达影响及其调控机制的研究.pdfVIP

和30例健康对照者外周血内皮抑素(竞争ELISA法)、血管内皮生长因子VEGF (双抗体夹心ELISA法)表达水平的变化，探讨内皮抑素、VEGF与2型糖尿病 大血管并发症的关系。 2、原代人脐静脉内皮细胞(HIⅣEC)分离、培养后，取I{IⅣEC随机加入 不同浓度葡萄糖液中培养，分为正糖对照组(5．6mmol／LGlu)，高糖组 集各组不同作用时间点内皮细胞的总RNA和蛋白，采用RT-PCR法检测mⅣEc 中ES 糖对人内皮细胞内皮抑素在基因转录及蛋白翻译水平上的影响，探索高糖环境下 内皮细胞内皮抑素的代谢特点。 中NO含量变化，分析高糖对NO的产量和内皮抑素蛋白表达的影响；分别应用 一氧化氮合酶抑制剂L-NAME、一氧化氮供体SNP、鸟苷酸环化酶抑制剂ODQ 信号传导通路对高糖时人脐静脉内皮细胞表达内皮抑素调控的可能性。 结果 l、内皮抑素、VEGF在T2DM大血管病变各组(包括合并一种大血管病变 组、合并两种以上大血管病变组)血清含量分别显著高于T2DM无大血管病变和 VS(11．2士8．6) 健康对照组(内皮抑素：(32．4士15．6)ng／ml，(35．1+20．2)ng／rnl 无大血管病变组间比较差异不显著：VEGF在伴发一种大血管病变、多种大血管 P 病变组间比较表达水平显著上调((133．5土36．8)pedr01VS(302．1士52．4)p酌n1 如．01)，而内皮抑素的表达差异不显著；在T2DM伴发一种大血管病变组，内皮 抑素和VEGF成线性正相关(r=O．540，PO．01)。 2、11．2mmol／L葡萄糖组，内皮细胞中ES mRNA和ES蛋白表达水平随时间 22．4mm01]L葡萄糖组，内皮细胞ESmRNA和ES蛋白表达水平在24、48、72h 随时间延长而增高，于72h时二者的表达水平显著高于对照组(PO．05)，而96h 时表达水平明显低于对照组(Po．05)；对照组中ESmRNA的表达不随时间延长 而有差异性改变，但ES蛋白的表达水平随时闻延长出现降低，96h其表达水平明 显低于2411(P0．05) 3、短时间作用下(72h)，随葡萄糖浓度升高，HUVEC中ES蛋白的表达和上 (P0．05)。 结论 1、内皮抑素和VEGF在T2DM大血管病变的发生、发展中可能起作用，两 者的变化在一定程度和条件下受自稳态调节机制的控制，血管生成致动脉粥样硬 化产生是两种作用相反的细胞因子间自稳态平衡被打破失衡的结果。 2、高浓度葡萄糖对HUVEC中ES mRNA和蛋白表达水平的影响是双向的， 即短时间内起促进作用，具时间效应性；作用至一定时间后，高糖开始抑制 HUVEC中ESmRNA和Es蛋白的表达。 3、高糖短期作用时，HUVEC中内皮抑素蛋白表达水平和NO生成量随葡萄 糖浓度升高而增加，具浓度依赖性；高糖时HUVEC中内皮抑素蛋白表达的调控 可部分通过NO／cGMP传导通路实现。 关键词 内皮抑素：血管内皮细胞；葡萄糖；新生血管形成；信号传导 ·英文论著摘要· MechanismandEffectsofGlucoseonEndostatin in VascularEndothefialCells Expression Objective Endostatinisall 20kDa derivedfrom anti-angiogeniccarboxyl4erminalfragment that inhibits invitr