复方蒲黄肠康胶囊中五倍子质量标准探究.docVIP

复方蒲黄肠康胶囊中五倍子质量标准探究摘 要：目的：建立复方蒲黄肠康胶囊中五倍子的质量标准。方法：用TLC法鉴别制剂中的五倍子，用HPLC法测定制剂中没食子酸的含量。色谱柱为C18柱(200mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇：0.1%磷酸溶液(10∶90)；检测波长为273nm。结果：在TLC色谱中能检出五倍子，没食子酸在26～56μg/ml范围内，线性关系良好(r2=0.9999)，平均回收率为98.99%，RSD为1.22%。结论：所建鉴别方法专属性强，定量方法简便、准确，可用于复方蒲黄肠康胶囊中五倍子的质量控制。 关键词：薄层色谱法；高效液相色谱法；复方蒲黄肠康胶囊；五倍子；没食子酸 中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)04-031-03 复方蒲黄肠康胶囊是辽宁医学生物技术研究所新开发的复方中药制剂，以天然药物蒲黄为主药，联合五倍子、苦参等中药材，经提取后而制成的肠溶胶囊，具有抗菌消炎、止血、涩肠、解痉、止泻的作用。临床上主要用于治疗溃疡性结肠炎。 没食子酸是五倍子中主要成分之一，它能与蛋白质结合，对肠道细菌有直接的杀灭作用[1]。对其进行定性、定量分析的方法有三氯化铁法[2]，薄层扫描法[3]和高效液相色谱法[4]。为有效的控制其质量，本实验以五倍子中的没食子酸为指标，用薄层色谱法鉴别胶囊中五倍子的存在，用高效液相色谱法测定没食子酸的含量，并初步制订了质量标准。 1 仪器与试剂 高效液相色谱仪：岛津SCL―10Avp高效液相色谱仪，SPD―10Avp二极管阵列检测器，LC-10ATVP色谱泵。薄层用硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；复方蒲黄肠康胶囊由辽宁医学院新药研究所提供；没食子酸对照品，购自中国药品生物制品检定所，为含量测定用；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂为分析纯。 2 方法与结果 2.1 五倍子的鉴别 2.1.1 供试液的制备 将复方蒲黄肠康胶囊除去囊壳，取0.5g本品粉末，加甲醇5ml，超声处理15min，滤过，滤液作为供试品溶液。 2.1.2 对照品溶液的制备 取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。 2.1.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例制成缺五倍子的阴性对照药，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。 照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验[5]，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲酸乙脂-甲酸(5∶5∶1)为展开剂，上行展开12cm，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。阴性对照品相应的位置上无干扰。(见图1) 图1 五倍子TLC色谱图 1.供试品溶液；2.对照品溶液；3.阴性对照品溶液 2.2 五倍子的含量测定 2.2.1 色谱条件 用Hypersil 0DS2色谱柱(200mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇：0.1%磷酸溶液(10：90)；检测波长为273nm。理论塔板数按没食子酸计算应不低于3000。 2.2.2 对照品溶液的制备 称没食子酸对照品2mg，置50ml容量瓶中，加50%甲醇制成40μg/ml的溶液。 2.2.3 供试品溶液的制备 取本品胶囊内容物，研细，称约1g，精密称定，精密加入4mol/L的盐酸溶液50ml.，在水浴中加热水解3.5h，放冷，滤过。精密量取续滤液1ml，置100ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。 2.2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例制成缺五倍子的阴性对照药，按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。 2.2.5 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液适量，用0.45μm滤膜滤过，各进样10μl，按上述色谱条件测定，记录色谱图(见图2)，按外标法计算样品含量。 图2 阴性对照品(上)，对照品(中)，供试品(下) 2.2.6 标准曲线的绘制 精密称取没食子酸对照品置于10mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容，制成浓度分别为26μg/ml、32μg/ml、40μg/ml、48μg/ml、56μg/ml的溶液。分别精密量取以上5种浓度溶液10μl注入高效液相色谱仪进行测定，以峰面积与浓度进行线性回归，得回归方程为：Y=41218X-49520，r2=0.9999。表明浓度在26～56μg/ml范围内线性关系良好。 2.2.7 稳定性考察 取同一样品溶液3批，精密吸取10μl，分别在0，6，12进样，结果RSD为2.94%(n=3)，表明样品溶液在12h内稳定。