抑癌基因FHIT及PTEN在肝细胞癌中表达及其意义.docVIP

抑癌基因FHIT及PTEN在肝细胞癌中表达及其意义[摘要] 目的:探讨FHIT和PTEN基因在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义。方法:采用免疫组化Envision二步法检测FHIT蛋白及PTEN蛋白在44例HCC组织及10例正常肝组织中的表达。结果:44例肝细胞癌组织中FHIT和PTEN蛋白的阴性表达率分别为38.6%(17/44)和47.7%(21/44),10例正常肝组织中FHIT和PTEN蛋白的阴性表达率均为0,两种抑癌基因在肝细胞癌组织与正常肝组织中的阴性表达率之间差异有统计学意义(P0.05)。PTEN蛋白的阴性表达率与病理分级显著相关(P0.05)。相关性分析发现,FHIT和PTEN在HCC中的阴性表达呈正相关(rs=0.427,P0.05). The negative expression rate of PTEN was significantly associated with pathological grade (P0.05). The negative expression of FHIT was positively correlated with the negative expression of PTEN in HCC (rs=0.427, P 1 材料与方法 1.1 材料 随机抽取哈尔滨医科大学附属肿瘤医院2004～2006年经手术治疗的44例HCC患者的存档标本作为实验组,其中,男30例,女14例;年龄31～72岁,平均52岁;术前均未行放、化疗,其中39例患者经信件或电话随访。HBsAg阳性30例;抗-HBc阳性2例;血清AFP水平阳性27例;分化程度按Edmondson标准[1]:Ⅰ级10例,Ⅱ级14例,Ⅲ级16例,Ⅳ级4例;TNM临床分期按文献标准[2]:Ⅰ期8例,Ⅱ期28例,Ⅲ期8例。另取6例肝血管瘤术后组织及4例因胆道手术切除的部分正常肝组织标本作为对照组。所有标本均经10%中性福尔马林液固定、石蜡包埋,4 μm厚连续切片。 1.2 实验方法 1.2.1 试剂兔抗人FHIT多克隆抗体、小鼠抗人PTEN单克隆抗体、鼠抗人P27蛋白单克隆抗体和PV-6000二步法免疫组化检测试剂盒均为即用型产品,购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 1.2.2 免疫组化操作按PV-6000试剂盒说明书进行。染色步骤:组织切片常规脱蜡、水化;3% H2O2去离子水孵育15 min以阻断内源性过氧化物酶,PBS缓冲液冲洗;分别滴加兔抗人FHIT多克隆抗体、小鼠抗人PTEN单克隆抗体,室温过夜,PBS缓冲液冲洗,2 min×3次;滴加通用型IgG抗体(Fab段)-HRP多聚体,室温孵育20 min,PBS缓冲液冲洗,2 min×3次;应用DAB溶液显色;蒸馏水冲洗、复染、脱水、封片。同时用PBS代替一抗作为染色的阴性对照,用已知的染色阳性切片作阳性对照。 1.3 结果判断标准 1.3.1 FHIT结果判定参考文献报道的方法观察FHIT蛋白的分布及阳性率[3]。先按染色强度打分:0分为无色;1分为浅黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色。再按阳性细胞所占百分比打分:0分为阴性;1分为阳性细胞数≤10%;2分为11%～50%;3分为51%～75%;4分为75%。以染色强度与阳性细胞百分比的乘积[0～4分为免疫反应阴性(-);4～8分为阳性(+);9～12分为强阳性(++)]来确定FHIT蛋白的表达情况。 1.3.2 PTEN结果判定PTEN阳性表达为棕黄色颗粒。每张病理切片随机选取5个视野,每个视野计数100个细胞,共500个细胞,计算PTEN阳性细胞所占比例,50%为高表达(++)。 以上检测由两位不知患者临床资料的病理科医师采用盲法独立检测,结果取平均值。 1.4 统计学方法 分类资料根据样本理论频数用χ2检验或Fisher确切概率法,等级资料相关性检验采用Spearman等级相关分析,经SPSS 12.0软件分析,P5 cm),其FHIT蛋白表达阴性率差异也有统计学意义(P0.05),见表2。 图1HCC组织FHIT蛋白染色呈阳性 (10×10) Fig.1Positive expression of FHIT protein staining in HCC (10×10) 图2HCC组织FHIT蛋白染色呈阳性 (10×20) Fig.2Positive expression of FHIT protein staining in HCC (10×20) 图3HCC组织FHIT蛋白染色呈阴性 (10×10) Fig.3Negative expres