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生姜茎基腐病病原鉴定和生物学特性探究摘要：通过致病性测定、形态特征观察及rDNA ITS序列分析，对生姜茎基腐病病原菌进行研究。结果表明：近年来山东生姜上新出现的生姜茎基腐病的病原菌为Pythium myriotylum，该病原菌生长的温度范围是1～35 ℃，最适温度25 ℃，pH值范围5～12，最适pH值为7。 关键词：生姜；结群腐霉；形态特征；ITS序列分析；生物学特性 中图分类号： S632.5 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006—6500.2012.05.007 Study on Identification and Biological Characteristics of the Pathogen Causing Rhizome Rot Disease in Ginger SUN Xia， FANG Tao， QIN Yan （Biotechnology Institute， Laiwu College for Vocational Technology， Laiwu， Shandong 271100，China） Abstract： The suspected pathogen was studied by pathogenicity test， morphology identification and ribosomal DNA— ITS sequence analysis in the article. The results showed that the pathogen of ginger rot disease in Shandong was identified as Pythium myriotylum. The temperature range of the pathogen was 1～35 ℃， the suitable culture temperature was 25 ℃， and suitable pH value was 7. Key words： ginger； Pythium myriotylum； morphological identification； ITS sequence analysis； biological characteristics 生姜茎基腐病是近年来山东生姜产区发生的一种新病害，该病从生姜出苗1～2个月开始发生，首先表现为茎基部变黑、腐烂，而地上茎叶仍为绿色，随后老叶变黄萎蔫。在盛发期，基部变黑2～3 d后，茎基部完全腐烂，从老姜处齐断，病株死亡，当地人形象地称为“烂脖子”病。 据笔者调查，该病从2005年开始陆续在山东莱芜、安丘、莱阳等地发生，并逐渐上升为主要病害，田间病株率在5%～80%之间，严重地块造成绝产。由于该病从出苗后就开始发生，并很快致使姜块腐烂而失去应用价值，给姜民带来了巨大的经济损失，严重挫伤了姜农种植的积极性。目前，国内对生姜茎基腐病病原菌的报道较少，为此，笔者通过对生姜茎基腐病病原菌的分离、纯化，从病原菌的形态学、致病性、生物学和分子生物学方面进行了系统研究，旨在为生姜茎基腐病的预防和防治奠定理论依据。 1 材料和方法 1.1 病原菌的分离和培养 生姜出苗1～2个月后，从莱芜市郊各姜田采集具有典型症状的病样。采用组织分离法对病斑上的病菌进行分离，在玉米琼脂培养基（CMA）上培养，然后采用单菌丝先端切割的方法进一步纯化、培养。借鉴观察链格孢（Alternaria Nees） sporulation pattern的方法，对孢子囊、卵孢子及藏卵器进行观察，并显微照相[3]。 1.2 致病性测定 采用土埋法[4]进行致病性测定。将完好无病害的生姜种于装有灭菌土的培养钵中，将纯化后的菌株在CMA培养基上培养3 d，用直径0.7 cm的打孔器打出菌片，取一片接种到植株基部，然后覆盖一层灭菌土。适时浇水，保持一定的土壤湿度，在25 ℃培养，以不接菌为对照，记录发病症状。 1.3 分子生物学方法鉴定 1.3.1 基因组DNA的提取 采用改良CTAB法提取DNA。 1.3.2 PCR扩增 利用真菌核糖体rDNA转录间隔区（ITS） PCR扩增的通用引物ITS1（5—TCCGTAGGTGAACCTGCGC—3’）和ITS4 （5—TCCTCCGCTTTTG ATATG C—3’） 对提取的真菌总DNA进行PCR扩增。50 μL PCR反应体系包括：10×PCR Buffer 5 μL，10 mmol·L—1 dNTP mix 1 μL， 模板DNA溶液10 pmol，5 U·μL—1 Taq 酶0.25 μL，10 μmol·L—1 ITS1和IT