精浆弹性蛋白酶水平-白细胞定量及男性不育关系.docVIP

精浆弹性蛋白酶水平\白细胞定量及男性不育关系[摘要] 目的:探讨男性不育患者精浆弹性蛋白酶水平、白细胞定量与精液质量的关系。方法:对137例男性不育患者采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行精浆弹性蛋白酶水平检测,采用过氧化物酶染色法进行精液白细胞定量测定,采用清华同方CASAS-QH-Ⅲ计算机辅助精液分析仪进行精液质量分析。结果:精浆弹性蛋白酶水平异常组与对照组精液pH、精子密度、a级精子百分率、精子活力比较,差异有统计学意义(P1 000 ng/ml者归为确证感染组。 1.2 方法 1.2.1 精液标本采集嘱患者取精前禁欲2～7 d,用手淫法一次性采集全部精液置于干燥无菌的、最小刻度为1 ml的广口容器中,置于37℃水浴箱中液化。 1.2.2 精浆弹性蛋白酶浓度测定先将液化好的精液离心取精浆,采用ELISA法测定精浆弹性蛋白酶水平。按照试剂盒说明操作,精浆弹性蛋白酶定量检测试剂盒(批号2009020)购于深圳华康生物医学工程有限公司,酶标仪为Thermo生产,型号为MK3。 1.2.3 精液白细胞定量检测采用正甲苯胺法。精液白细胞过氧化酶染色试剂盒(批购于深圳华康生物医学工程有限公司。 1.2.4 精液pH值测定在射精后1 h内,将一滴精液于pH试纸上均匀展开30 s后,浸湿区域的颜色均匀一致时观察结果。检测采用天津市金达化学试剂有限公司的精密pH试纸。 1.2.5 精液质量分析待精液完全液化后,采用清华同方CASAS-QH-Ⅲ计算机辅助精液分析仪,按WHO推荐的方法和标准,检查精子密度、a级精子百分率、b级精子百分率、精子活力(为a级精子百分率与b级精子百分率之和)。 1.3 统计学处理 所有资料用Excel建立数据库,数据以均数±标准差(x±s)表示,以SPSS 11.5统计软件进行处理。弹性蛋白酶水平与精液质量各指标比较、白细胞含量与精液质量比较采用独立样本t检验;白细胞含量与精浆弹性蛋白酶浓度比较采用Spearman秩相关检验进行分析,P0.05)。见表3。 3 讨论 弹性蛋白酶是机体内水解弹性蛋白的酶,分布于胰腺、中性粒细胞、巨噬细胞等多种组织和细胞中。存在于中性粒细胞中的弹性蛋白酶称为NE,是一种丝氨酸中性蛋白水解酶,主要存在于中性粒细胞嗜天青颗粒中,核膜和高尔基体等细胞器中也有少量分布[4]。研究发现,精液发生炎症感染时,中性粒细胞释放大量弹性蛋白酶,与其他氧化物(如活性氧、过氧化氢、氢氧根离子等)共同发挥局部抗感染效应,除具备抗感染作用外,弹性蛋白酶也能刺激细胞合成活性氧自由基,自由基产生脂质过氧化作用,导致精子膜功能障碍和膜酶损伤[5]。本研究显示,精浆弹性蛋白酶水平异常组的精液pH、精子密度、a级精子百分率、精子活力不同,与陈桂冰等[6]的研究结果一致。本研究还显示,隐性感染组的精液pH、b级精子百分率和精子活力与确证感染组有显著差异,说明精液中精浆弹性蛋白酶可影响精液的酸碱度和精子活力,造成精液内酸碱环境改变,并进而导致精液质量改变。 研究显示,精液中白细胞数如1×106/ml,称为白细胞精子症。白细胞精子症造成的不育占男性不育的10%～20%。精液感染导致白细胞增高,其活性氧片断(ROS,包括氧自由基、过氧化氢等)水平也相应升高[7-9],可导致精子膜功能障碍,损伤精子膜,使精子运动大大降低。Athayde等[10]也报道了精液中高浓度白细胞引起活性氧水平升高,与精液质量下降有关。本研究结果显示,白细胞含量异常组精液pH、精子线形运动速度(a级精子百分率)和精子活力存在差异,可能与上述白细胞损伤精子的机制有关。研究显示,大量白细胞在附睾、前列腺上皮的聚集,也可能引起附属性腺功能障碍[11],造成精液量减少,但本研究却未发现精液量存在差异,与刘睿智等[12]的结果不一致。以上结果说明,白细胞精子症可能通过改变精液的理化性质,使精液pH值偏碱,不利于精子的存活和活动,影响精液质量。 本研究提示,细菌性生殖道炎症可能出现白血病精子症,并诱导精浆弹性蛋白酶的升高,弹性蛋白酶水平升高与白细胞水平有相关关系,两者均可导致精液酸碱环境的改变,并可能影响精子的运动速度和活力,影响精液质量并可能造成男性不育。因此,在诊断男性不育中应高度重视精液白细胞检测,发现精液中“圆细胞”增多,应进行染色处理,以鉴别白细胞与生殖细胞,作出正确诊断,对症治疗。同时,尿道表面脱落的炎症细胞可能会造成精液污染,使精液白细胞升高,精液白细胞计数有时不能反应炎症的真实情况,而非细菌性生殖道炎症时,精液白细胞可不升高,也影响对炎症的诊断和治疗。本研究未发现精液白细胞含量与精液量、精子密度、b级精子百分率有影响,是否因样本量偏少