温敏性凝胶及海藻糖辅助变性溶菌酶复性的的分析研究.pdfVIP

中文摘要 本文研究了聚N一异丙基丙烯酰胺凝胶(PNIPAAm)和海藻糖促进变性一还原 溶菌酶的复性作用。首先研究了凝胶制备的最佳条件和凝胶的物理性质，在确定 最适用的凝胶后，考察了各利r网素条件下(制胶温度、酶浓度和逐渐升温)凝胶 对复性收率的影响；其次，对不同的复性条件下(温度、pH值和盐浓度)海藻 糖对溶菌酶的复性作用进行了研究。运用相关动力学模型，对不同浓度的海藻糖 和盐酸胍辅助溶菌酶复性的动力学过程进行了深入分析，探讨了海藻糖促进溶菌 酶复性的机理。 结果表明，以总单体浓度(T)为10％，交联度(c)为5％，制胶温度为 22。C制备的PNIPAAm具有最件的溶胀倍率和缩水倍率，并具有良好的温敏性能。 48h后溶胀倍率仅为O69倍，且具有良好的溶胀与收缩重复性。 利用PNIPAAm的温敏吸放特性，完成对变性酶液在复性过程中的逐渐释放、 逐渐折叠，从而达到类似流力¨操作的复性效果，可有效提高最终复性收率。 海藻糖具有促进变性溶菌酶复性的作用：存在最佳的添加浓度使复性收率最 高；其最佳操作条件为：pH8—8．5，复性温度35．37。C。利用三级表观动力学方程 拟合r不同浓度海藻糖和盐酸胍辅助溶菌酶复性的动力学过程。分析表明．添加 海藻糖后nJ‘使聚集体生成速率常数Kn明显减小，但对复性速率常数KN影响不 大；在 定骱酸胍浓度下，随海藻糖浓度的增大，K。先降低后升高，在最佳浓 度时K一出现最小值，由于此时Kw／KA出现最大值，因此复性收率r最大；在酶 浓度不变的条件下，海藻糖辅助复性的最佳浓度随着盐酸胍浓度的增大而增大。 这说明海藻糖能够有效抑制蛋白质分子问折叠，防止折叠作川，但不抑制分子内 的折叠作用，因此在一定范闱内提高其浓度可以促进蛋白质的折叠作用，从而提 高复性收率。 关键Ⅻ：溶菌酶 聚N．亓内培阿烯酰胺海藻糖盐酸胍 ABSTRACT Basedontherelevant andthe research experimentpre—designedmethod，this dissertationhas thatPNIPAAmandtrehalosehave effect brieflyinvestigated refolding ondenatured-reductive conditionfor and lysozyme．Firstly,the optimal making for hasbeenstudiedaswellasthe character．After preparinggelation gel’S physical themostsuitable researchhasfocusedonvariousfactors selecting gel，the including gelmakingtemperature，enzymeconcentration，and on graduallytemperaturerising trehaloseinfluenceon of has refoldingyield．Secondly,the yield refoldinglysozyme also beenaddressedundervarious conditionssuc